Какой аккумулятор стоит на лада гранта: Какой выбрать аккумулятор для Лада Гранта, Калина, Приора, 4×4, Нива » Лада.Онлайн

Аккумулятор Лада Гранта — какой выбрать, какой лучше подходит на 16 и 8 клапанов, полярность

Лада Гранта — один из наиболее популярных отечественных автомобилей. За год в стране производится и продается более 110-120 тысяч этих авто. Машину ценят за неплохую надежность и хорошее отношение цены к качеству. Увы, детали авто не вечны и рано или поздно встает вопрос о выборе нового аккумулятора.

Правильно подобранный аккумулятор на Гранту обеспечит надежный и стабильный пуск двигателя в любую погоду вне зависимости от нагрузки в ходе эксплуатации, работает максимально продолжительный срок. Для суровых климатических условий важен ток холодной прокрутки и работоспособность аккумулятора в разное время года.

Заводской аккумулятор для Лада Гранта АКОМ «Стандарт» имеет характеристики:

  • номинальная емкость: 55 А/ч;
  • ток холодной прокрутки: 425 А;
  • номинальное напряжение: 12 В;
  • габариты: 242х175х190 мм;
  • полярность аккумулятора: прямая.

Срок службы заводского АКБ, в среднем, составляет 3 года в зависимости от условий эксплуатации.

При покупке АКБ обращают внимание на технические характеристики изделия, модификацию, год выпуска автомобиля. Ниже представляем оптимальные модели альтернативных вариантов АКБ. По кнопке перейти можно выбрать подходящие виды аккумуляторов. Размер аналоговых аккумуляторов, представленных ниже, 242x175x190 мм, полярность прямая.

Внимание! Для 8-ми и 16-ти клапанных двигателей подходящие АКБ могут отличаться. В случае сомнений в подборе обращайте к нашему менеджеру.

Какой аккумулятор для Лады Гранты выбрать

VAIPER 60ah 6СТ-60.1-L

Цена снижена

VAIPER как всегда отличается демократичными ценами за хорошее качество

Емкость

60 а/ч

Пусковой ток

480a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

3 375 ₽

Обычная цена

Предложение действует: 29 дн. 20 ч. 58 м.

3 900 ₽

2 685 ₽

При сдаче старого АКБ

АКОМ EFB 65 а/ч 6СТ-65 VL L+

Надежный АКБ с применением EFB технологии за очень низкую цену 

Емкость

65 а/ч

Пусковой ток

670a

Габариты

242x174x190

Полярность

прямая

5 017 ₽

Обычная цена

4 266 ₽

При сдаче старого АКБ

TITAN STANDART 60ah 6СТ-60.1 VL

Наш личный лидер рейтинга. Хороший АКБ для Гранты для этой стоимости

Емкость

60 а/ч

Пусковой ток

540a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

5 031 ₽

Обычная цена

4 268 ₽

При сдаче старого АКБ

Gigawatt G62L 60А/ч 540A

Свинцово-кислотный АКБ от Gigawatt радует низкой ценой и хорошим пусковым током 

Емкость

60 а/ч

Пусковой ток

540a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

4 750 ₽

Обычная цена

3 990 ₽

При сдаче старого АКБ

Bosch S4 006 60 а/ч 0092s40060

Еще один хороший аккумулятор для Granta от именитого бренда

Емкость

60 а/ч

Пусковой ток

540a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

6 069 ₽

Обычная цена

5 355 ₽

При сдаче старого АКБ

Varta blue dynamic D43 (560127054)

Varta как всегда не нуждается в представлении. Эта модель пользуется огромным спросом. Покупатели выбирают за отличное соотношение цены к качеству 

Емкость

60 а/ч

Пусковой ток

540a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

5 733 ₽

Обычная цена

5 047 ₽

При сдаче старого АКБ

TUBOR SYNERGY 63ah 6СТ-63.1 VL

TUBOR — это расширенная до 3 лет гарантия и замечательные эксплуатационные характеристики

Емкость

63 а/ч

Пусковой ток

630a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

6 075 ₽

Обычная цена

5 374 ₽

При сдаче старого АКБ

TITAN EUROSILVER 63ah 6СТ-63. 1 VL

TITAN порадовал очередной удачной новинкой. Данный аккумулятор прослужит в Вашем авто многие годы 

Емкость

63 а/ч

Пусковой ток

630a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

6 075 ₽

Обычная цена

5 374 ₽

При сдаче старого АКБ

Mutlu 60 а/ч L2.60.054.B

Еще один очень удачный АКБ от Mutlu. Рекомендуем к приобретению 

Емкость

60 а/ч

Пусковой ток

540a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

5 355 ₽

Обычная цена

4 675 ₽

При сдаче старого АКБ

Mutlu 63 а/ч L2. 63.060.B

Mutlu производит аккумуляторы очень давно. И всегда делает это хорошо. Отличается расширенной 2 летней гарантией от производителя 

Емкость

63 а/ч

Пусковой ток

600a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

6 048 ₽

Обычная цена

5 376 ₽

При сдаче старого АКБ

TITAN ARCTIC 60ah 6СТ-60.0 VL

Один из наиболее приемлемых вариантов аккумулятора от хорошего российского производителя с репутацией

Емкость

60 а/ч

Пусковой ток

640a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

5 873 ₽

Обычная цена

5 168 ₽

При сдаче старого АКБ

BAT 60ah 6СТ-60. 1 L

Бюджетая модель с отличными характеристиками

Емкость

60 а/ч

Пусковой ток

480a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

3 247 ₽

Обычная цена

2 583 ₽

При сдаче старого АКБ

BAT 55ah 6СТ-55.1 L

Еще один выгодный вариант от BAT. Гарантия 18 месяцев

Емкость

55 а/ч

Пусковой ток

440a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

3 266 ₽

Обычная цена

2 598 ₽

При сдаче старого АКБ

VAIPER 55ah 6СТ-55. 1-L

Бюджетный отечественный аккумулятор по низкой цене

Емкость

55 а/ч

Пусковой ток

440a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

3 266 ₽

Обычная цена

2 598 ₽

При сдаче старого АКБ

Sputnik 55Ah 500А прямая полярность

Покупатели выбирают данную модель за низкую цену и приемлемые показатели

Емкость

55 а/ч

Пусковой ток

500a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

2 590 ₽

Обычная цена

1 990 ₽

При сдаче старого АКБ

EXTRA START (Катод) 60 а/ч 6СТ-60N L+

Хороший аккумулятор с полноценной 2-летней гарантией от производителя

Емкость

60 а/ч

Пусковой ток

540a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

3 172 ₽

Обычная цена

2 733 ₽

При сдаче старого АКБ

GLADIATOR dynamic 60Ah 560A прямая полярность

Отличный по соотношению цены к качеству аккумулятор для Лады Гранты

Емкость

60 а/ч

Пусковой ток

560A

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

4 590 ₽

Обычная цена

3 990 ₽

При сдаче старого АКБ

TUBOR STANDART 55ah 6СТ-55. 1 VL

Цена снижена

Еще один качественный аккумулятор от TUBOR, на который в настоящее время действует большая скидка. Торопитесь 

Емкость

55 а/ч

Пусковой ток

470a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

4 723 ₽

Обычная цена

Предложение действует: 29 дн. 20 ч. 58 м.

5 200 ₽

4 024 ₽

При сдаче старого АКБ

TITAN STANDART 62ah 6СТ-62.1 VL

Российская торговая марка TITAN принадлежит компании TUBOR и на протяжении уже нескольких десятков лет производит батареи, получающие положительные отзывы клиентов. В обзоре представлена одна из базовых моделей 

Емкость

62 а/ч

Пусковой ток

570a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

5 081 ₽

Обычная цена

4 412 ₽

При сдаче старого АКБ

Exide EB621 62 А/ч 540А

Основанная в 1888 году, компания Exide уже давно зарекомендовала себя, как надежный производитель качественных аккумуляторных батарей по приемлемым ценам 

Емкость

62 а/ч

Пусковой ток

540a

Габариты

242x175x190

Полярность

прямая

5 433 ₽

Обычная цена

4 939 ₽

При сдаче старого АКБ

Замена аккумулятора на Гранте

Замена аккумулятора на Гранте производится следующим образом. Первой снимают минусовую клемму, затем плюсовую. При такой последовательности АКБ выключается из цепи, исключается случайное короткое замыкание. Устанавливают аккумулятор в обратном порядке. Для доступа к некоторым элементам двигателя необходимо снимать площадку аккумулятора.

Аккумулятор Лада Гранта какая цена и какой выбрать

Аккумулятор – батарея, которая обеспечивает машину необходимой энергией для пуска стартера. От его качества будет зависеть возможность быстрого запуска авто, а так же возможность её эксплуатации в условиях пониженных температур. Таким образом, аккумулятор Лада Гранта – ключевой элемент, дающий возможность бесперебойной эксплуатации авто.

Аккумулятор заводской комплектации на Лада Гранта

Как бы это не звучало прискорбно, наш горячо любимый АвтоВаз привык экономить на всем, в том числе и на аккумуляторных батареях. Учитывая тот факт, что подавляющее большинство машин приобретаются для дальнейшей эксплуатации в условиях северных районов, этот факт становится наиболее нелепым.

Итак, как только машина спустилась с конвейера, в нее бережно устанавливают аккумулятор типа «стандарт», оснащенный явно недостаточными для нее 55 амперами, который выдает 425 пусковых ампер. Подобный аккумулятор на Гранту, цена которого является его основным и единственным преимуществом, может обеспечить разве что один сезон эксплуатации. Как показывает практика, длительная эксплуатация стандартной батареи возможна только в условиях мягкого климата.

Какой аккумулятор для Лада Гранта стоит выбрать

Для того чтобы машина смогла радовать своего владельца стабильным запуском, большинство владельцев предпочитают отказаться от заводской батареи, уступая место более надежным агрегатам.

Для того чтобы раскрыть все параметры выбора, необходимо:

– определить полярность старого аккумулятора

Недопустимо использование батареи иной полярности.

– посмотреть размеры

Длина, ширина, высота.

– посмотреть емкость аккумулятора

Важно!!! Если вы плохо разбираетесь в данных параметрах, перед походом в магазин сфотографируйте свой аккумулятор – это поможет продавцам направить выбор в нужное русло.

Бытует мнение, согласно которому батареи большей емкости устанавливать не рекомендуется из-за вероятной недозарядки – это не так. Конечно, если существенно превысить нормы – акб не сработается с системой. Для того, чтобы найти оптимальный вариант – загляните в паспорт машины. В рекомендациях вы всегда сможете найти ответ на вопрос о том, какой аккумулятор для Гранты будет идеален.

Так же стоит обратить внимание на технологию изготовления – если при изготовлении использовалась сурьма – газовыделение, как факт, будет присутствовать при эксплуатации. Как итог – необходимость постоянного подливания воды. Если батарея кальциевая – стоит постоянно обращать внимание на заряд, во избежание сюрпризов. Использование серебра усиливает качества, но значительно прибавляет веса в цене.

Аккумулятор на Гранту – разбираемся в производителях

Итак, чтобы установить адекватный аккумулятор на ладу гранту, необходимо обратить внимание на следующих производителей:

– Тюменские аккумуляторы, или Tyumen.

Батареи этого завода стоят на первом месте, так как если рассматривать бюджетный аккумулятор на ладу гранту, цена от этого производителя будет наиболее приемлемой. Кроме того, кто сможет так прочувствовать всю русскую душу Гранты, если не наш, отечественный производитель?!

– Аккумуляторы Topla.

Говоря о том, какой аккумулятор на Гранте, в рамках линейки данного производителя, покажет наилучшие результаты, ответом может послужить модель с выдачей 75 ампер. По мнению большинства владельцев Гранты, эта акб вполне совместима с заводским генератором, выдающим 115 ампер.

– Батареи «Зверь».

Эти батареи уже давно стали любимчиками у поклонников Автоваза. Их аккумуляторы для Гранты являются вполне приличным заменителем производственной некомпетентности.

Так же стоит приглядеться к таким производителям, как:

– Varta
– Medalist,
– A mega
– Mutlu
– Topla

Все вышеперечисленные производители заслуженно пользуются спросом в рамках приобретения аккумуляторов для Гранты.

Аккумулятор на Лада Гранта и особенность его выбора

Для того, чтобы подобрать аккумулятор для Гранты, цена на который может сильно варьироваться, в зависимости от производителя, нужно знать несколько тонкостей.

Так, к примеру, выпуск тока должен быть выше 425 ампер. Показатели ниже этой цифры не смогут обеспечить качественную передачу тока. Особенно этот факт важен для автовладельцев, проживающих в северных районах. При запуске холодного двигателя, чем выше эта цифра, тем больше ваш шанс на успех.

Лада Гранта аккумулятор и особенности его эксплуатации

Наша отечественная Гранта, аккумулятор которой нуждается в определенном уходе, не сможет выжить в условиях отсутствия внимания к технической части. Итак, для того чтобы продлить срок службы батареи, необходимо:

– Следить за уровнем электролита.

При необходимости, следует доливать дистиллированную воду, которая должна быть в «коллекции» каждого владельца машины.

– Периодически ставить аккум на зарядку.

Это правило актуально, опять же, для жителей северных районов. Даже если вы уверены в том, что завтра авто заведется, не стоит пренебрегать профилактикой.

– Следить за работоспособностью генератора и реле регулятора.

Их некорректная работа может сильно сказаться на работоспособности аккумуляторной батареи. Следует следить за наличием утечки тока в сетях.

Как распознать проблемы с батареей

Первое, что может указывать на некорректную работу аккума – длительный период завода авто. При снижении температур – полная невозможность завода машины. Так же к тревожным моментам могут относиться:

– окислившиеся клеммы

– различные повреждения корпуса (в том числе: трещины, вздутия)

– снижение плотности электролита

Главное – помнить, что чем чаще вы осуществляете проверки, тем выше вероятность своевременного распознавания проблемы.

Таким образом, при правильной эксплуатации, качественный аккумулятор будет надежным товарищем для любого автовладельца. Главное – вовремя увидеть проблему и приложить силы к её устранению, либо корректировке.

Вам также может быть интересно

Автор всех статей на сайте!
Собственный сервис “Нью-Лайн Авто”
Все виды работ.
Специализация: Lada

Киев, Одесса, Харьков, Днепропетровск, Запорожье. Акбмаркет

Как подобрать АКБ для авто ВАЗ (LADA) Granta 2190

Перед тем, как подобрать аккумулятор для ВАЗ (LADA) Granta 2190 важно протестировать соответствие модели аккумулятора правилам производителя авто. И исключительно на основе этого выбирать батарею.

АКБ встречаются 3-х типов:

  • Ремонтопригодные (с возможностью обслуживания). В подобных аккумуляторах есть возможность заменить блок пластин при замыкании, произвести регулировку объема рабочей массы. При этом АКБ этого вида, все реже встречаются в продаже.
  • Малообслуживаемые аккумуляторы. У автовладельцев выступают одними из самых популярных. Представленный на рынке модельный ряд позволяет найти АКБ для авто любого класса.
  • Не обслуживаемые аккумуляторы. Батареи не имеют в крышке пробок и отверстий для контроля плотности и уровня электролита. Эти батареи неплохо себя зарекомендовали для работы в обычных условиях. Их недостатком выступает довольно высокая цена, также они совместимы с немногими моделями автомобилей. Так что, при выборе АКБ для ВАЗ (LADA) Granta 2190, это также стоит принять во внимание.

При подборе батареи для ВАЗ (LADA) Granta 2190, потребуется принимать во внимание, что на эти автомобили устанавливают двигатели объемом 2,3 и 2,5 литра. Силовым агрегатам подобной мощности, требуется высокий объем электроэнергии. Так что, потребуется покупать более производительные аккумуляторы, которые могут гарантировать работоспособность всех систем авто и его запуск независимо от погодных условий.

Итак, АКБ для ВАЗ (LADA) Granta 2190, должна учитывать:

  • Пусковой ток. От данного параметра зависит сила тока, передаваемая стартеру, чтобы завести авто. Так как, чем более высоким является стартовое напряжение, тем быстрее завести двигатель. Хотя если вы собираетесь использовать ВАЗ (LADA) Granta 2190 при низких температурах, то лучше купить аккумулятор с показателем 680-750 Ач.
  • Ёмкой. В кроссоверы такой модели, необходимо устанавливать АКБ, имеющие номинал не менее 70 А/ч. Такого количества энергии будет достаточно, чтобы гарантировать стабильность работы всей электроники в машине обычной комплектации. Однако если в машине имеются нестандартные опции, скажем «Стоп-Старт», то лучше выбирать наиболее мощные батареи – не менее 80-90 А/ч.
  • Как расположены клеммы. Ещё одно различие японских машин от европейских. Так, у японских транспортных средств, клеммы наиболее тонкие. Это важно учесть, в процессе выбора аккумулятора. Еще учитывайте, что клемма «+» может располагаться как с левой, так ис правой стороны.
  • Размеры корпуса. У некоторых японских автомобилей, маленькие посадочные гнезда. Для того, чтобы грамотно поставить АКБ, лучше заблаговременно заменить место подключения АКБ. Лишь в том случае, когда габариты будут совпадать, это поможет не допустить колебаний и, как следствие быстрого износа АКБ.

От чего складывается цена АКБ на ВАЗ (LADA) Granta 2190?

  • Вида аккумуляторной батареи (обслуживаемая или нет и т.д)
  • От технических характеристик. Допустим, чем выше будет показатель ёмкости пускового тока, тем дороже аккумулятор.
  • Фирма-производитель. Чем известнее производитель АКБ, тем дороже его стоимость, хотя качество таких устройств заметно лучше.

Однако, такие АКБ приобретать только в сертифицированных маркетах. А размышлять о приобретении новой батареи необходимо тогда, когда вы стали периодически перезаряжать батарею с помощью «прикуривания» от иного транспортного средства или от стационарного зарядного. При замыкании, в таких батареях имеется возможность поменять блок пластин, а также отрегулировать объем рабочей массы.

В данных батареях нельзя проверить плотность и уровень электролита, т.к. Они без пробок либо отверстий. Очень большая стоимость остается их недостатком, также они совместимы с немногими моделями авто. Для данной модели авто, требуются аккумуляторы, номиналом не менее 70 А/ч. Потому что двигателю быстрее заводиться, если стартовое напряжение выше. В процессе подбора аккумуляторной батареи, это лучше учитывать.

АКБ для Lada Kalina, Granta, Priora

Начиная с 2004 года, автомобильный завод в Тольятти начал серьезное обновление модельного ряда. Первая принципиально новая машина получила название “Лада-Калина”. Первое поколение производилось до 2013 года, тогда же, уже при участии компании Рено, была выпущена вторая версия автомобиля, которая поставляется до сих пор.

Параллельно с Калиной, в 2007 году завод начал выпускать Lada Priora. Первое поколение производилось вплоть до 2013 года, затем запустили вторую серию авто, которая до сих пор продается через дилерскую сеть.

И в 2011 году завод представил еще одну новинку — Лада Гранта — первый отечественный автомобиль с коробкой автомат в штатной комплектации.

Генератор, стартер и объемы двигателей позволили заводу унифицировать размеры поддона для установки батареи, равно, как и требования к самой АКБ. Поэтому они одинаковые на всех трех моделях авто.

Что ставят под капот на АвтоВазе

В большинстве случаев завод оснащает “Гранты”, “Калины” и “Приоры” одной и той же моделью АКБ — это “Аком Стандарт Ca 6CT-55 VL. Батарея обладает габаритами 242х175х190 мм. , емкостью 55 а/ч, прямой полярностью и силой тока 425 А.

Эту модель нельзя отнести к разряду аккумуляторов премиум-класса, поэтому автовладельцам надо быть готовыми к ее замене буквально через пару лет после покупки нового авто.

Что выбрать из многообразия рынка аккумуляторов

Если перед автолюбителем стоит задача подобрать аккумулятор на Lada Priora, Kalina или Granta, ему нужно знать несколько простых требований:

  1. Размеры поддона для установки АКБ равны 242х175х190 мм.
  2. Емкость батареи может варьироваться в пределах от 55 до 75 а/ч.
  3. Сила пускового тока должна быть от 420 до 650 А.
  4. Батареи для отечественных автомобилей должны обладать прямой полярностью.

Текущие предложения рынка АКБ на Лада Гранта, Калина и Приора:

  1. Один из самых бюджетных вариантов — аккумулятор АвтоФан 55L — его размеры 242х175х190 мм., емкость 55 а/ч, сила тока 42 А. Эта модель обладает прямой полярностью.
  2. Для ценителей немецкого качества подойдет модель от MOLL — MG 62L с габаритами 242х175х190 мм. Батарея выдает пусковой ток в 600 А и обладает емкостью 62 а/ч. Полярность — прямая. Эту модель нельзя назвать бюджетной, но она способна бесперебойно служить 4-6 лет.
  3. Аккумулятор Blizzaro находится в среднем ценовом сегменте. Его емкость средняя — 60 а/ч, сила пускового тока — 450 А, а размеры соответствуют заводским 242х175х190 мм. Полярность — прямая.
  4. Хорошо зарекомендовали себя в работе на отечественных авто продукты от компании Тюмень. Модель Standard 60L имеет емкость 60 а/ч, силу тока 520 А при габаритах 242х175х190 мм. и прямой полярности.
  5. Еще одна модель от немецкого бренда, но с куда более низкой ценой, чем у Moll — Bosch S4 006 (60L). Она имеет емкость в 60 а/ч, выдает пусковой ток в 540 А и имеет прямую полярность при геометрических размерах — 242х175х190 мм.

Чтобы произвести замену вышедшего из строя аккумулятора на Гранте, Приоре или Калине потребуется два стандартных плоских автомобильных ключа — на “10 и на “13. Сначала меньшим ключом следует ослабить и отсоединить от батареи клемму со знаком “минус”, затем проделать то же самое со вторым (“положительным”) клеммным зажимом. После этого можно ключом на “13 открутить и снять прижимную планку на аккумуляторе, расположенную сверху. Старая батарея извлекается, на ее место в поддоне размещается новая. После чего все действия проделываются в обратном порядке.

Какой выбрать аккумулятор на Лада Гранта: заводской или другой?

Содержание статьи:

  1. Какой аккумулятор выбрать для Лады Гранты
  2. Заводской аккумулятор MUTLU 62 А/ч для Лада Гранта
  3. Обслуживание аккумулятора на Ладе Гранта
  4. Как снять аккумуляторную батарею Лада Гранта
  5. Как завести ГРАНТУ в морозы
  6. Дублирующие провода с генератора на аккумулятор Лада Гранта
  7. Видео по замене аккумулятора

Содержание

      • 0.0.1
        Какой аккумулятор выбрать для Лады Гранты
      • 0.0.2
        Какой же аккумулятор купить для Лады Гранты
      • 0.0.3
        Выбираем емкость и мощность пускового тока АКБ на Ладу Гранту
      • 0.0.4
        Заводской аккумулятор MUTLU 62 А/ч дляЛада Гранта
      • 0.0.5
        Обслуживание аккумулятора на Ладе Гранта
      • 0.0.6
        Как снять аккумуляторную батарею Лада Гранта
      • 0.0.7
        Как завести ГРАНТУ в морозы
      • 0.0.8
        Дублирующие провода с генератора на аккумулятор Лада Гранта
      • 0.0.9
        Как заменить аккумулятор в Лада Гранта
  • 1
    Выбираем фирму производителя
  • 2
    Выбор по емкости и мощности пускового тока
Какой аккумулятор выбрать для Лады Гранты

Всякий раз, когда заходишь на форум владельцев автомобилей ВАЗ и открываешь ветки «электрика» или «электробрудование» встречаешь темы с заголовками «какой аккумулятор выбрать?».

Этим вопросом задаются многие автомобилисты, когда приходит время менять АКБ. В представленной статье попробуем разобраться, какой же аккумулятор может стать лучшей альтернативой стоковой АКБ, которая устанавливается заводом-изготовителем на автомобили Лада Гранта.

Сразу же отметим, что из отзывов владельцев Лада Гранта родная аккумуляторная батарея АКОМ имеет не самые лучшие показатели. Так, к примеру, в сильные морозы двигатель автомобиля отказывается запускаться, что говорить о низком токе холодного пуска. Встречаются случаи, что в зимний период, когда отметка термометра опускается до – 30 градусов корпус батареи попросту разрывает, так как происходит замерзание электролита. В общем можно назвать еще много причин, по которым аккумуляторы торговой марки АКОМ, которые устанавливаются на Лада Гранта, не являются надежными и их покупка не будет оправданной.

Какой же аккумулятор купить для Лады Гранты

Прежде чем коснутся технических нюансов аккумуляторных батарей известных торговых марок, хочется отметить, что покупка дешевого АКБ повлечет за собой массу хлопот, что в итоге заставит вас, все же потратится и приобрести не только дороже, но в тоже время и качественную батарею. Так что не тратьте деньги попусту, а сразу же обращайте внимание на известные марки аккумуляторов, которые попадают под изречение народной мудрости “цена = качество”

Наверное, многие автовладельцы знают про аккумуляторы известных торговых марок, как “Varta” или “Bosch”, купив такую батарею вы, безусловно, сделаете правильный выбор. Но, исходя из собственного опыта хочу вам открыть секрет, что на отечественном рынке существует АКБ, которая не только не уступает известным брендам, но и в какой-то мере имеет преимущество перед ними. Речь идет об аккумуляторах турецкого бренда “Mutlu”. Эти батареи имеют срок службы не менее пяти лет, не нуждаются в обслуживании, вибро и термоустойчивы, имеют низкий саморазряд, но самое главное имеют отличные показания тока холодного запуска, и при этом цена таких аккумуляторов ниже, чем у известных аналогов.

Выбираем емкость и мощность пускового тока АКБ на Ладу Гранту

Изначально на автомобилях лада Гранта устанавливаются аккумуляторы емкостью 55 Ач, установка батареи с другими показателями не рекомендуется, так как зарядка его будет осуществляться не полностью, что приведет к ее скорому выходу из строя, а работа генератора будет, происходит при максимальных нагрузках, что также скажется не лучшем образом на его долговечности. Как следствие использование аккумулятора с большей емкостью может привести к выходу из строя диодного моста генератора.

С емкостью аккумулятора для Лады Гранта определились, она должна составлять 55 Ач. Теперь разберемся с пусковым током, который необходим, чтобы запустить двигатель, даже в сильный мороз. У родного АКОМа пусковой ток составлял всего лишь 425 Ампер, и этого не хватало, чтобы запустить двигатель в мороз. Из этого следует, что необходимо покупать аккумулятор с повышенным пусковым током. Оптимальным значением будет покупка аккумуляторной батареи с номинальным значением пускового тока 530 Амп/ч.

И в заключении, не скупитесь на качественные детали, в противном случае будете платить двойную цену за ремонт вашего автомобиля, не зря ведь гласит пословица о том, что скупой платит дважды.

Заводской аккумулятор MUTLU 62 А/ч дляЛада Гранта

Сегодня потёк аккумулятор заводской. Вроде, говорили долго будит служить — так нет. Поехал в магазин приобрёл Аккумулятор MUTLU 62 А/ч.

Характеристика Полярность Прямая (L+) Производитель Mutlu Серия Calcium Silver ETN 562 115 054 Технические характеристики Напряжение, В 12 Емкость, Ah 62 Ток холодной прокрутки, A 540 Дополнительная информация Особенности Батарея необслуживаемая, Индикатор состояния заряженности, Расширенный диапазон рабочих температур, Ручка для переноски Дополнительно Диапазон рабочих температур: от -41° до +61°С Тип крепления — B13 Корпус аккумулятора из морозостойкого полипропилена высокой прочности Кальциевая технология изготовления пластин для уменьшения саморазряда и потери воды Устойчивость к вибрации Габариты устройства Размеры, мм 190 x 242 x 175 мм

Обслуживание аккумулятора на Ладе Гранта

Для того чтобы не быть застигнутым врасплох, в самое неподходящее время (например, зимой), неисправностью или разрядом аккумуляторной батареи, необходимо проводить своевременное техническое обслуживание, проверку уровня и плотности электролита.

Проверка уровня электролита

Для проверки уровня понадобится стеклянная трубочка, которую необходимо опустить до упора в аккумулятор, зажать верхнее отверстие пальцем, достать и посмотреть уровень по количеству электролита. Уровень электролита должен быть выше сепараторов аккумулятора на 5-10 мм.

Если аккумулятор имеет индикатор, то уровень электролита должен быть с ним на одном уровне или выше на пару миллиметров, максимально на 5мм.

Проверка уровня электролита является обязательной, так как при естественных условиях эксплуатации, уровень падает из-за испарения воды и в этом случае необходимо доливать в аккумулятор дистиллированную воду.

Если в процессе эксплуатации авто на аккумуляторной батарее видны следы электролита, возможны следующие причины:

· высокий уровень электролита, из-за чего происходит выплёскивание, чтоб исправить, необходимо отобрать электролит резиновой грушей до нужного уровня.

· появление трещин на корпусе, в этом случае требуется отремонтировать аккумулятор.

· причиной появления электролита на корпусе, может быть не отрегулированное напряжение зарядного тока и сульфатирование.

Сульфатирование аккумуляторной батареи– это образование не растворимого сернокислого свинца. Происходит это из-за эксплуатации аккумулятора с низким уровнем электролита, во время длительного хранения, разряженного или не полностью заряженного аккумулятора. Если сульфатирование незначительное, то это можно исправить с помощью полного разряда-заряда аккумулятора малыми токами, а если батарея имеет сильное сульфатирование, то батарею следует заменить, она не подлежит восстановлению.

Проверка плотности электролита

Необходимый этап в обслуживании аккумулятора, является проверка плотности электролита. Плотность проверяют с помощью ареометра, для этого в прибор, с помощью резиновой груши, набирают электролит из аккумулятора и смотрят по шкале показания плотности.

Для умеренного климата плотность соответствует 1,28 г/см.

Электролит нужной плотности можно приобрести в любом авто магазине или приготовить самому. Для приготовления электролита плотностью 1,28 г/см, необходима серная кислота (0,36 г.) высшего сорта, которую вливают маленькими порциями в дистиллированную воду (1 л.). Нужно знать, что вода в кислоте закипает, поэтому нужно лить именно кислоту в воду, а не наоборот.

Определить заряженность аккумулятора по напряжению можно только через 8 часов после эксплуатации автомобиля при температуре 25 °С. Напряжение полностью заряженного аккумулятора от 14,0 до 14,2 В. Заряжают аккумулятор постоянным током пропорциональным емкости батареи, то есть если батарея ёмкостью 55 ампер, то зарядный ток равен 5,5 ампер.

Как снять аккумуляторную батарею Лада Гранта

Снятие аккумуляторной батареи на автомобиле Лада Гранта производят для ее замены на новую, подключению к зарядному устройству или профилактических работах, а также, если наличие батареи будет мешать ходу выполнения других работ. Подготовьте стандартный набор инструментов и проделайте следующую последовательность действий:

· Ослабляем затяжку гайки стяжного болта и отсоединяем клемму минус от аккумулятора.

· Снимаем резиновый колпачок с плюсовой клеммы и так же ключом ослабляем затяжку гайки стяжного болта.

· Снимаем провод с плюсовой клеммы.

· Далее ослабляем одну из гаек стяжных шпилек крепления аккумулятора.

· Снимаем планку крепления батареи вместе с одной из стяжек.

· После чего снимаем сам аккумулятор.

· Выполните необходимый ремонт или замену, после чего установку нового проведите в обратной последовательности.

· Перед подсоединением клемм, зачистите их от окислов и обработайте аэрозольной смазкой.

На этом ремонтные работы по снятию аккумуляторной батареи на автомобиле Ваз 2190 завершены.

Как завести ГРАНТУ в морозы

1. Будем считать, что двери вы благополучно открыли и уселись на крайне холодное сиденье. В самый первый момент может показаться, что холоднее не бывает ничего в жизни, чем грантовское кресло в -25. Вставьте ключ и включите зажигание. Только зажигание, пытаться заводить не надо. 2. У вас автоматически включится дневной ходовой огонь. Это даст определённое движение молекул электролита внутри аккумулятора. Они начнут «оживать». Чтобы этот процесс пошёл быстрее, на 20 секунд включаем ближний свет фар. 3. По истечении 20 секунд обязательно выключаем свет фар! Обесточиваем вообще весь автомобиль, никакой работающей музыки и лампочек на потолке, нам нужен максимальный заряд для обеспечения пускового тока. 4. Ставим автомобиль на нейтральную скорость (надеюсь, вы оставляете на ночь машину именно на скорости, а не на ручнике – в противном случае велика вероятность никуда не уехать даже при заведённом двигателе). Сцепление оставляем выжитым. 5. Поворачиваем ключ и слушаем, как вращается стартер. В лучшем случае стартер прокрутится пару раз и двигатель заведётся, если этого не произошло, продолжаем крутить стартер приблизительно секунд 7. Под конец, если стартер хоть как-то вращается, при исправной системе впрыска и двигателе, последний должен завестись! 6. Если двигатель не завёлся, ни в коем случае не пробуем завести его опять! Выключите зажигание, покурите, либо леденец пососите, если не курите. Ибо весь пусковой ток ушёл на то, чтобы вращать стартер предыдущие 7 секунд, и надо дать ему снова накопить себя. На это уйдёт приблизительно минуты две. 7. Пробуем снова. На этот раз уже без включённого ближнего света. Если стартер начал крутить лучше, двигатель обязать запуститься. Если стартер не крутит, тогда два варианта: ищем прикуривальщика, либо снимаем аккумулятор и идём домой его греть. 8. Помните, минус всегда скидывается с аккумулятора первым! Надевается всё в обратной последовательности. Т.е. если вы накидывайте себе провода от другой машины, первым должен накидываться плюс. Затем – минус. Снимайте в обратной последовательности. 9. Если возможности прикурить у другого автомобиля нет, а тащить аккумулятор домой — не вариант, остаётся заводить гранту с толкача! Хотя зимой в сильный мороз это будет сделать и непросто, но возможно. Для этого включите зажигание, выжмите сцепление и включите вторую передачу. Сцепление не отпускайте. Когда буксируемый автомобиль разгонится до 20-30 км/ч, медленно начинайте отжимать сцепление. Если свечи автомобиля в порядке, а топливная система работает без сбоя, произойдет воспламенение горючей смеси и двигатель заведётся. 10. Помните, даже если вам удалось завести авто в -30 мороза, его управление нуждается в особом внимание. Ибо в автомобиле в такую погоду замерзают практически все жидкости, тем самым их функциональность может ухудшаться. Например, масло в стойках будет хуже отрабатывать ямы, изменится в негативную сторону управляемость, резина будет более дубовая, а это значит сцепление с дорогой ухудшится, масло в трансмиссии также изменит свою вязкость, что скажется на плавности включения передач и работу элементов КПП в принципе. Все эти нюансы нужно учитывать, управляя автомобилем в холодную погоду.

Дублирующие провода с генератора на аккумулятор Лада Гранта

Решил хоть как-то уменьшить просадки напряжения. А именно путем дублирования проводов с гены на аккумулятор. Провод кг 35. Для наконечников у меня естественно нет специального инструмента, делал подручными средствами. Зажимал в тисках, а потом стучал по наконечникам вот этой штукой.

В итоге получилось как-то так. Держится крепко, проверил, один конец цеплял за гвоздь, а другой тянул всем весом — и ничего.

Плюс прицепил к генератору, там один болт. Проложил примерно, как нарисовано зеленой полоской, провода ушло примерно 1,8 метра. Но подобраться к генератору с 16 кл. двиглом — целая история. Сверху не достать, полез снизу. Снял защиту, получил порцию снега на голову, потом откручивал пыльник, который так и не смог снять до конца (красным отмечены саморезы). А не смог снять из-за одного из саморезов, к которому не подлезть никак. Он находится слишком близко к бамперу, ни одна отвертка туда не влезла (красная стрелка вверх). Еще один саморез находится за колесом.

Наконечник, который прицепляется к аккумулятору, пришлось немного сточить, чтобы не упирался. Да, никакой термоусадки, только изолента. Весь плюсовой провод обмотал изолентой, в скором времени куплю гофру и пущу через нее.

Минус продублировал уже с двигателя. Провод менее полуметра получился, и залезть туда нетрудно. Хотел подцепить к корпусу генератора, но не нашел подходящего места.

Итог: естественно просад напряжения от музыки никуда не делся, но порядком уменьшился. Фары подмигивают под музыку, но теперь это не смертельно для сабвуферов, т.к напряжение ниже чем 12 не падает (падало в пиках до 11.8 — 11.5 -, усилок клиповал, и сабы начинали вонять). Теперь на усилителе при нагрузке напряжение поднялось примерно на 0,5 вольта, может чуть больше. Еще из приятного, что при повороте руля (у меня ЭУР) фары теперь не тускнеют, и будто руль стало легче крутить. Думаю, и аккумулятор будет лучше заряжаться, пока еще совсем не отказал.

Как заменить аккумулятор в Лада Гранта

https://www.drive2.ru/l/5716910/, http://vgrante.ru/?cat=15&pcat=2, http://remladavaz.ru/kak-snyat-akkumulyatornuyu-batareyu-lada-granta, https://www.drive2.ru/l/1981021/, https://www.drive2.ru/l/8264515/ , http://remontauto-vaz.ru/page/kakoj-akkumuljator-vybrat-dlja-lady-granty

Решил написать свою статью для данного сайта о выборе аккумуляторной батареи для своей Лады Гранты.

Дело было около месяца назад, как раз в период сильнейших морозов, поэтому удалось еще тогда немного протестировать батарею на холод и зимний запуск двигателя.

Конечно, многие подумают, что замена АКБ — преждевременная, так как автомобили совсем недавно начали выпускаться, но если честно, родной АКОМ уже совсем хило стал крутить в последнее время, особенно это сказывалось в сильные морозы.

Да и мощности пускового тока маловато, а мне хотелось что-то поинтереснее.

Зарядка аккумулятора автомобиля — www.TOL-AVTO.ru

Компания «Тол-Авто» выступает в качестве дилера «Лада». Мы активно сотрудничаем с представителями отечественного автопрома, у нас можно купить новую Гранту лифтбек на выгодных условиях. Зарядка аккумулятора является актуальным вопросом для многих автолюбителей.

Зарядить аккумулятор автомобиля сможет каждый водитель, для достижения этой цели необходимо заранее ознакомиться со всеми нюансами этой процедуры. Купить лада Ларгус можно в нашем автосалоне.

Всего существует несколько способов зарядки аккумулятора. Самым простым способом является использование зарядного устройства. В первую очередь необходимо присоединить провода зарядного устройства к клеммам аккумулятора, при осуществлении этой процедуры важно руководствоваться правилом, согласно которому плюс подсоединяется к плюсу, а минус к минусу. При нарушении этого правила аккумулятор быстро исчерпать имеющийся запас зарядки. Купить лада Веста св, цена на которую Вас приятно удивит, можно в нашем автосалоне.

С точки зрения практической реализации лучше использовать зарядку аккумулятора без снятия аккумулятора. Для этого необходимо подключить зарядное устройство к двигателю проводами, в среднем зарядка занимает 12 часов. Чтобы завести автомобиль, необходимо заряжать аккумулятор в течение 15 минут. Полная зарядка аккумулятора подразумевает отключение всех приборов, такой подход позволит получить качественный результат. Купить икс рей, цена на него является выгодной, можно в нашем автосалоне.

Произвести зарядку аккумулятора в зимний период можно с помощью ряда методов, как со снятием АКБ, так и без снятия. В первом случае аккумулятор снимается и заряжается с помощью зарядного устройства, перед этим необходимо оставить устройство на полчаса в тепле. Второй случай подразумевает использование теплой воды, которой обливается аккумулятор, при этом нужно оставить клеммы двигателями сухими. Далее можно подключить зарядное устройство и оставить аккумулятор заряжаться. Эта процедура должна выполняться в оперативном формате и не занимать много времени. Зарядки в течение получаса будет достаточно, чтобы завести автомобиль и отогнать его в гараж для дальнейшей зарядки. Купить ниву 4х4 в Тольятти можно в нашем автосалоне.

Зарядка аккумулятора автомобиля

Tol-avto.ru

2020-10-30 14:08:10

2020-10-30 14:08:10

tol-avto.ru/images/logo.png

Аккумулятор на Лада Гранта. Какую аккумулятрную батарею выбрать для Лады Гранты

Всякий раз, когда заходишь на форум владельцев автомобилей ВАЗ и открываешь ветки «электрика» или «электробрудование» встречаешь темы с заголовками «какой аккумулятор выбрать?«. Этим вопросом задаются многие автомобилисты, когда приходит время менять АКБ. В представленной статье попробуем разобраться, какой же аккумулятор может стать лучшей альтернативой стоковой АКБ, которая устанавливается заводом-изготовителем на автомобили Лада Гранта.



Сразу же отметим, что из отзывов владельцев Лада Гранта родная аккумуляторная батарея АКОМ имеет не самые лучшие показатели. Так, к примеру, в сильные морозы двигатель автомобиля отказывается запускаться, что говорить о низком токе холодного пуска. Встречаются случаи, что в зимний период, когда отметка термометра опускается до – 30 градусов корпус батареи попросту разрывает, так как происходит замерзание электролита. В общем можно назвать еще много причин, по которым аккумуляторы торговой марки АКОМ, которые устанавливаются на Лада Гранта, не являются надежными и их покупка не будет оправданной.

Какой же аккумулятор купить для Лады Гранты

Прежде чем коснутся технических нюансов аккумуляторных батарей известных торговых марок, хочется отметить, что покупка дешевого АКБ повлечет за собой массу хлопот, что в итоге заставит вас, все же потратится и приобрести не только дороже, но в тоже время и качественную батарею. Так что не тратьте деньги попусту, а сразу же обращайте внимание на известные марки аккумуляторов, которые попадают под изречение народной мудрости “цена = качество”

Наверное, многие автовладельцы знают про аккумуляторы известных торговых марок, как “Varta” или “Bosch”, купив такую батарею вы, безусловно, сделаете правильный выбор. Но, исходя из собственного опыта хочу вам открыть секрет, что на отечественном рынке существует АКБ, которая не только не уступает известным брендам, но и в какой то мере имеет преимущество перед ними. Речь идет об аккумуляторах турецкого бренда “Mutlu”. Эти батареи имеют срок службы не менее пяти лет, не нуждаются в обслуживании, вибро и термоустойчивы, имеют низкий саморазряд, но самое главное имеют отличные показания тока холодного запуска, и при этом цена таких аккумуляторов ниже, чем у известных аналогов.

Выбираем емкость и мощность пускового тока АКБ на Ладу Гранту

Изначально на автомобилях лада Гранта устанавливаются аккумуляторы емкостью 55 Ач, установка батареи с другими показателями не рекомендуется, так как зарядка его будет осуществляться не полностью, что приведет к ее скорому выходу из строя, а работа генератора будет, происходит при максимальных нагрузках, что также скажется не лучшем образом на его долговечности. Как следствие использование аккумулятора с большей емкостью может привести к выходу из строя диодного моста генератора.

С емкостью аккумулятора для Лады Гранта определились, она должна составлять 55 Ач. Теперь разберемся с пусковым током, который необходим, чтобы запустить двигатель, даже в сильный мороз. У родного АКОМа пусковой ток составлял всего лишь 425 Ампер, и этого не хватало, чтобы запустить двигатель в мороз. Из этого следует, что необходимо покупать аккумулятор с повышенным пусковым током. Оптимальным значением будет покупка аккумуляторной батареи с номинальным значением пускового тока 530 Амп/ч.

И в заключении, не скупитесь на качественные детали, в противном случае будете платить двойную цену за ремонт вашего автомобиля, не зря ведь гласит пословица о том, что скупой платит дважды.

DOE объявляет о предоставлении электромобилей и аккумуляторов; Налогоплательщики США субсидируют рост рынка литий-ионных аккумуляторов в Корее

Министерство энергетики США (DOE) объявило о грантах в размере 2,4 миллиарда долларов для ускорения производства и внедрения следующего поколения американских батарей и электромобилей. Эти средства пойдут на поддержку 48 новых передовых компонентов производства аккумуляторных батарей и электроприводов, а также проектов по внедрению электромобилей в более чем 20 штатах.

Это объявление знаменует собой самую крупную инвестицию в передовые аккумуляторные технологии для гибридных автомобилей и автомобилей с электрическим приводом из когда-либо сделанных.Представители отрасли ожидают, что эти инвестиции в размере 2,4 миллиарда долларов в сочетании с еще 2,4 миллиардами долларов в расходах от лауреатов премии напрямую приведут к созданию десятков тысяч рабочих мест в аккумуляторной и автомобильной промышленности США.

Что касается батарей, то 1,5 миллиарда долларов из грантов были выделены производителям в США для производства батарей и их компонентов, а также для расширения возможностей по переработке батарей. Из этих средств почти 1,1 миллиарда долларов были предоставлены шести американским компаниям, половина из которых связана с южнокорейскими материнскими компаниями или поставщиками.Тремя компаниями, принадлежащими американцам, были: Johnson Controls Inc. (2,99 миллиарда долларов), A123 Systems Inc. (249 миллиардов долларов) и EnerDel Inc. (118 миллиардов долларов).

KD ABG MI LLC из Мидленда, штат Мичиган, дочерняя компания Dow Kokam , совместного предприятия Kokam Co. Ltd. и Dow Chemical Co. получила $ 161 млрд на производство катода из оксида марганца / графита Литий-ионные элементы для гибридных и электромобилей.Kokam — южнокорейская компания.

Compact Power Inc. с тремя заводами в Мичигане получила 151 миллиард долларов от имени своей южнокорейской материнской компании LG Chem Ltd. . General Motors Corp. получила 105 миллиардов долларов на производство крупносерийных аккумуляторных батарей для Volt. Пока что основным поставщиком ячеек будет LG Chem.

Другой южнокорейский производитель, Samsung SDI , объявил о заключении крупной сделки с BMW на поставку литий-ионных аккумуляторов немецкой компании.Некоторые обозреватели говорят, что объединенные силы компаний (в первую очередь LG Chem и Samsung SDI) намерены вырвать у японских компаний контроль над аккумуляторным бизнесом с помощью своих новых технологий.

Японские производители аккумуляторов в настоящее время занимают 95% рынка никель-металлических гибридных аккумуляторов. С конца 1990-х годов японские производители использовали гибридные никель-металлические батареи в основном из соображений стоимости. Теперь новая парадигма указывает на легкие литий-ионные батареи, на которых южнокорейские фирмы все больше внимания уделяют.

Где жужжание?: Обнаружение и устранение нежелательных вибраций

Обычно возникают два типа жужжания *:

  • Гудение тела — часто из-за дребезжания электронных компонентов около
  • Жужжание ладов — обычно из-за слишком низкого срабатывания

Шаг 1. Проверьте «жужжание тела»

Если ваша гитара представляет собой акустико-электрическую модель, первым делом проверьте наличие незакрепленных электронных компонентов. Извлеките аккумулятор, чтобы увидеть, не дребезжит ли он в своей коробке — если гудение уходит после извлечения аккумулятора, это является виновником.Аккумулятор просто необходимо закрепить или накрыть подкладкой; один из вариантов — обернуть аккумулятор изолентой или резинкой, или вы можете наклеить толстую поролоновую ленту на дверцу батарейного отсека, чтобы усилить давление на батарею, когда дверца закрыта.

Вы также можете проверить наличие проводов внутри корпуса, которые могут контактировать с боковой стороной гитары. Иногда смещение проводки от боковой части гитары приводит к исчезновению симпатических вибраций. В наших электрических моделях также используются небольшие держатели для проводов, чтобы прикрепить провода к боковой стороне гитары.Если они отсоединились от гитары, их можно снова прикрепить с помощью небольшой капли суперклея или прочного двустороннего скотча.

Шаг 2. Fret Buzz

Если жужжание похоже на гудение на ладу , действие может быть просто слишком низким. У вашей гитары есть тенденция реагировать на климат, из-за чего лес может немного двигаться, изменяя первоначальную настройку инструмента. Не волнуйтесь (каламбур), так как эти небольшие движения совершенно нормальны и в определенной степени могут произойти.Эти небольшие изменения можно отрегулировать — читайте подробности!

Чтобы избавиться от шума лада, первым шагом всегда должна быть замена струн новым набором — иногда это сразу проясняет ситуацию, а также гарантирует точность следующих нескольких шагов. Наши заводские размеры для классических моделей составляют 3-4 мм от верха 12-го лада до низа нижней струны ми и около 2,5-3 мм для моделей кроссовера или фламенко. Любое действие, установленное ниже этих минимальных размеров, обычно вызывает сильное жужжание.

Быстрый совет по регулировке и измерению высоты подъема: две сложенные друг на друга четверти будут иметь размер 3,5 мм, что является отличным целевым измерением и идеальным ориентиром для измерения, если у вас нет линейки. Действие можно повысить, ослабив анкерный стержень или, при необходимости, слегка отодвинув седло. Любой квалифицированный специалист по ремонту сможет помочь вам внести эти корректировки, если вам это неудобно.

Жужжания часто можно избежать, внимательно следя за и поддерживая влажность вашего инструмента и часто заменяя струны .Обеспечение надлежащего увлажнения вашей гитары снизит частоту необходимых настроек и регулировок, а также позволит ей звучать и играть как можно лучше!

* Гудение также может быть вызвано повреждением инструмента, в том числе деформированной накладкой грифа, высоким ладом или незакрепленными скобами внутри корпуса гитары. Если описанные выше обходные пути не привели к решению, обратитесь к местному специалисту по ремонту для дальнейшего осмотра и помощи. *

Запуск батареи

UWM получил второй федеральный грант на коммерциализацию

Физики UWM Мария Гайдарджиска-Йосифовска (слева) и Кэрол Хишмугл используют свой грант STTR Phase II, чтобы вывести на рынок лучшие литий-ионные батареи через свой стартап SafeLi LLC.(Фотоуслуги UWM)

Автор: Лаура Отто

Отношения с университетами

Физики UWM Кэрол Хиршмугл и Мария Гайдарджиска-Йосифовска получили от Министерства энергетики США грант в размере чуть более 1 миллиона долларов на разработку литий-ионных (литий-ионных) элементов батарей, изготовленных из уникального запатентованного материала, называемого монооксидом графена.

Программа передачи технологий для малого бизнеса (STTR) — это второй федеральный грант для SafeLi LLC, стартапа, созданного профессорами UWM, на дальнейшую коммерциализацию материалов, созданных ими в своих физических лабораториях.

Объединив постоянные усилия по совершенствованию литий-ионных аккумуляторов, внедрение которых в 1991 году принесло Нобелевскую премию 2019 года, SafeLi будет производить компоненты аккумуляторов, в том числе аноды (положительно заряженные электроды). Их нововведения помогут повысить безопасность и время автономной работы, а также сократить время зарядки.

«Монооксид графена, новый наноматериал, который представляет собой двумерную твердую кристаллическую форму монооксида углерода (CO), является первой и единственной твердой формой CO, известной человечеству, которая возникает при комнатной температуре и проявляет захватывающие свойства», — сказала Гайдарджиска. Иосифовская.

Чтобы научиться выводить свои исследовательские открытия на рынок, физики присоединились к программе Milwaukee I-Corps, партнерству пяти региональных университетов, цель которого — превратить академические знания в продукты и стартапы.

Это единственный сайт I-Corps в Висконсине, управляемый UWM и финансируемый Национальным научным фондом. Через I-Corps команда познакомилась с бизнес-наставником Лорен Петерсон, предпринимателем из Центра предпринимательства UWM в Любаре. Впоследствии исследователи были приняты в национальную программу I-Corps, что дало им доступ к интервью с людьми из нескольких ведущих компаний, заинтересованных в развитии аккумуляторов.

«Благодаря своим свойствам наш анодный материал может подорвать рынок аккумуляторных батарей», — сказал Хиршмуль. «Опыт I-Corps сделал наш стартап возможным, чего мы никогда не ожидали».

Текущее финансирование — это грант Фазы II, который следует за успешным завершением Фазы I технической и коммерческой награды за доказательство концепции. Грант Фазы II будет поддерживать увеличенное производство монооксида графена, чтобы позволить разработку более крупных прототипов батарей, подходящих для электромобилей.Это также позволит SafeLi вырасти до 10 сотрудников и начать поиск ангельских, венчурных и / или корпоративных капиталовложений.

Благодаря этому гранту общее финансирование SafeLi на федеральном уровне и уровне штата составляет 1,5 миллиона долларов с момента запуска бизнеса в декабре 2016 года. Компания недавно участвовала в конкурсе бизнес-планов губернатора Висконсина, выиграв третье место в Подразделении перспективного производства, в котором участвовало более 60 участников. , и выиграла первый приз на питч-конкурсе SEED SPOT, организованном Ассоциацией женщин в науке.

Возможность получения гранта STTR уникальна, она поддерживает формальное сотрудничество между SafeLi и UWM на этапах I и II и выполняет роль STTR в преодолении разрыва между фундаментальной наукой и коммерциализацией полученных инноваций.

Прежде чем стать предпринимателями, Хиршмугль и Гайдарджиска-Йосифовска опубликовали сотни исследовательских статей в рецензируемых журналах и получили более 10 миллионов долларов на финансирование своих исследований в области нанонауки и нанотехнологии оксидных материалов, взаимодействия поверхности и объема, синтеза материалов, а также электронно- и инфракрасного излучения. анализ на основе.Гайдарджиска-Йосифовска в настоящее время является деканом Высшей школы UWM.

электромобилей обеспокоены отменой субсидии

Индийские производители электрических двухколесных транспортных средств ополчились против недавнего уведомления правительства об отмене субсидий на низкоскоростные автомобили с литиевыми аккумуляторами (скорость менее 25 км / час), хотя на этот сегмент приходится около 95% общих продаж. . Ранее низкоскоростные литиевые скутеры получали субсидии в размере до 17 800 рупий.Однако субсидии для высокоскоростных транспортных средств будут продолжаться.

Низкоскоростные электромобили, используемые в основном школьниками, женщинами и пожилыми пассажирами, не требуют регистрации или водительских прав. В результате этот сегмент составляет основную часть общих продаж двухколесных электромобилей в основных странах, включая США, Европу, Ближний Восток, Китай и другие.

По оценкам отрасли, из в общей сложности около 55 000 единиц электрических двухколесных транспортных средств, проданных в прошлом году, около 53 000 автомобилей были низкоскоростными.А резкое изменение правила, вступившее в силу с 1 октября, уничтожит отрасль, заявили руководители отрасли. Министерство в уведомлении от 27 сентября, продлевая схему ускоренного внедрения и производства (гибридных и) электрических транспортных средств (FAME-1) на шесть месяцев, приказало отменить субсидии для обычных аккумуляторов (свинцовых аккумуляторов) и незарегистрированных (с низким энергопотреблением). скорость литиевые батареи) автомобили начиная с 1 октября.

Сохиндер Гилл, генеральный директор лоббистской группы Общества производителей электромобилей (SMEV), в письме, написанном министру тяжелой промышленности Ананту Гите, сообщил, что произошел надзор, который привел к серьезным негативным последствиям для отрасли.SMEV считает своими членами Mahindra & Mahindra (M&M), Tata Motors, Hero Group и Ashok Leyland.

По словам Гилла, в то время как исключение транспортных средств со свинцовыми батареями оправдано (из-за их загрязнения окружающей среды), решение о запрете низкоскоростных транспортных средств с литиевыми батареями не оправдано, по крайней мере, на следующие несколько лет. Однако исключения для запрета доступа могут быть сделаны для таких мегаполисов, как Мумбаи, Дели и других, где медленное движение транспортных средств может создать проблемы с дорожным движением. «Из 14 компаний, получивших субсидию, 12 компаний используют низкоскоростные литиевые двухколесные автомобили», — сказал он.

По иронии судьбы, Министерство автомобильного транспорта и шоссейных дорог (MoRTH) под руководством профсоюзного министра Нитина Гадкари, как говорят, играет с идеей придти со специальной регистрацией и лицензиями для транспортных средств, которыми будут управлять школьники (возраст 16-18 лет). годы).

Промышленность все еще ожидает объявления FAME-2, которое, как ожидается, будет объявлено в апреле. FAME-2 — это вторая фаза схемы стимулирования, предоставляемой потребителям электромобилей (ЭМ) в Индии.Первый этап, который называется FAME-1, был введен в 2015 году и предлагал льготы для гибридных и электрических транспортных средств в размере до 29 000 рупий для двухколесных транспортных средств и 1,38 рупий для автомобилей. Новая схема получит финансовую поддержку в размере около 5 500 крор рупий и, как ожидается, продлится около пяти лет.

В недавнем отчете Icra утверждалось, что стоимость аккумуляторов электромобилей, составляющая почти треть общей стоимости, останется ключевым фактором, определяющим степень признания электромобилей во всем мире.Важным событием является то, что стоимость литий-ионных аккумуляторов для электромобилей упала почти на четверть до 208 долларов США за кВт · ч в 2017 году с 800 долларов США за кВт · ч в 2011 году.

По мнению отраслевых экспертов, производство электромобилей в Индии находится на начальной стадии. Это менее 1% от общего объема продаж автомобилей, но в ближайшие несколько лет он может вырасти более чем на 5%. В настоящее время на дорогах Индии стоит более 4 миллионов электрических двухколесных транспортных средств и несколько тысяч электромобилей.

Объемы производства в отрасли колеблются, в основном, в зависимости от стимулов, предлагаемых государством, добавили эксперты. Кроме того, более 95% электромобилей — это низкоскоростные электросамокаты (менее 25 км / ч), не требующие регистрации и лицензий.

Почти все электросамокаты работают от свинцовых аккумуляторов, чтобы поддерживать низкие цены, однако отказы аккумуляторов и низкий срок службы аккумуляторов стали основными ограничивающими факторами для продаж, помимо государственных субсидий.

Однако Шридхар V, партнер Grant Thornton India LLP, сказал: «Уведомление о продлении субсидий на зарегистрированные двухколесные электромобили до марта 2019 года, вероятно, сделано с намерением охватить наибольший объем проданного сегмента двухколесных транспортных средств (менее 125 куб. и выше 50 см3) для перехода на электрические двухколесные автомобили.Ожидается, что это окажет хорошее влияние на уровни загрязнения и сократит импорт топлива, поскольку потребление топлива в этом сегменте также оценивается как значительное «.

ВПЕРЕДИ ПО УДАРНОЙ ДОРОГЕ
  • Из 55 000 единиц двухколесных электромобилей, проданных в прошлом году, около 53 000 автомобилей относятся к низкоскоростному сегменту. автомобили для школьников

В МЕДЛЕННОМ ПРОЦЕССЕ
  • 5 рупий.5k cr — Схема FAME-2 для финансовой поддержки электромобилей
  • 1,38 лакха — Стимулы, предлагаемые электромобилям в рамках FAME-1
  • 17,800 рупий — Низкоскоростные литиевые скутеры получили субсидии ранее

Мотортрейд не получит грантов на электромобили до окончания бюджета

Автодилерам сообщили, что гранты на электромобили в следующем году не будут выделяться автовладельцам до конца октября, что усиливает опасения, что схема может быть изменена в бюджете.

Дилеры также выразили опасения, что правительство может также внести изменения в режимы налога на автотранспортные средства и налога на регистрацию транспортных средств (VRT).

Текущие гранты гарантированы для всех электромобилей, купленных и зарегистрированных в 2019 году. Согласно письму Управления по устойчивой энергетике Ирландии, гранты на любые электромобили, которые будут приобретены и зарегистрированы в 2020 году, в настоящее время не выделяются.

Несмотря на то, что покупатели не будут платить из своего кармана, по словам дилеров, неопределенность будет до середины октября, когда предполагается, что новая схема будет введена на следующий год после того, как Департамент окружающей среды окончательно утвердит свой бюджет.

Обычно у автосалонов есть четыре месяца с момента подачи заявки на грант в размере до 10 000 евро для регистрации автомобиля. Начиная с этой недели, дилеры, которые подадут заявки, должны будут зарегистрировать автомобили до конца года.

«Как и те, кто занимается модернизацией, не могут планировать на господдержку. Это дополнительная неопределенность для рынка в области поставок электромобилей. . . рассматривается министром [Ричардом Брутоном] как неотъемлемая часть его плана действий по борьбе с изменением климата », — сказал один источник, знакомый со схемой.

Общество автомобильной промышленности Ирландии (Simi), которое представляет большинство дилеров, подтвердило, что уведомление было выпущено на этой неделе.Однако его больше всего беспокоят налоги на автомобили и изменения VRT, которые, по его мнению, могут оказаться необходимыми, но окажутся для отрасли не в то время, в условиях неопределенности Брексита.

Заместитель генерального директора

Simi Том Каллен выразил надежду, что уведомление об электромобиле было процедурным. И он понимает, что непосредственной угрозы грантам нет.

Он сказал, что будет больше всего обеспокоен тем, что климатическая повестка дня вызовет изменения в налогах и VRT.«Мы собираемся увидеть изменения, но сейчас не время для этого».

Представитель департамента сообщила, что заявки на получение грантов на электромобили на 2020 год откроются в октябре.

Она сказала, что в рамках грантов 2019 года было выделено около 27,5 миллионов евро на покупку до 6000 электрических и подключаемых гибридов. «Любое изменение существующей схемы должно рассматриваться в контексте обычного процесса оценки», — добавила она.

Грядущий Brexit

Ирландские автомобильные дилеры в прошлом месяце призвали правительство отложить любые серьезные изменения режима налогообложения транспортных средств как минимум на 12 месяцев из-за опасений, что это приведет к росту цен на новые автомобили, поставит под угрозу рабочие места и ударит по налоговым поступлениям.

Ни автомобилестроительная промышленность, ни потребители не готовы к значительным налоговым изменениям в октябре этого года, тем более что это может совпасть с Brexit, сказал Сими.Он признал, что правительство пыталось использовать налоговый режим как средство, чтобы подтолкнуть людей к использованию электромобилей.

Переход на электричество произойдет, настаивал он, «независимо от того, что собирается делать правительство, потому что европейская автомобильная промышленность уже много лет работает над нормами чистоты воздуха».

Розничная цена самых популярных электромобилей составляет примерно 50 000 евро. Грант в размере 10 000 евро приносит им 40 000 евро. Средняя цена нового автомобиля в республике составляет около 20 000 евро, а средняя цена автомобиля на ирландском рынке, включая импортные и подержанные автомобили, составляет 15 000 евро. Исходя из этого, ирландский рынок «еще далек от порога доступности этих автомобилей», — сказал Сими.

Правительство сообщило о планах реформирования налогового режима в октябрьском бюджете в рамках мер по стимулированию покупки электромобилей.Недавно г-н Брутон объявил о развертывании 1000 новых уличных точек зарядки электромобилей в местах, которые будут определены советами, с целью создания почти миллиона таких автомобилей на ирландских дорогах к 2030 году.

Визуализация митохондриального потока в отдельных клетках с помощью датчика FRET для пирувата

Abstract

Митохондриальный поток в настоящее время доступен при низком разрешении.Здесь мы представляем генетически закодированный датчик FRET для пирувата и методы количественного измерения транспорта пирувата, продукции пирувата и потребления митохондриального пирувата в интактных индивидуальных клетках с высоким временным разрешением. В клетках, нейронах и астроцитах HEK293 поглощение митохондриального пирувата было насыщенным на физиологическом уровне, показывая, что скорость метаболизма определяется внутренними свойствами органеллы, а не доступностью субстрата. Потенциал сенсора был дополнительно продемонстрирован на нейронах, где было обнаружено, что митохондриальный поток увеличился на 300% в течение секунд после переходного процесса кальция, вызванного коротким тета-всплеском, в то время как уровни глюкозы остались неизменными.Напротив, митохондрии астроцитов были нечувствительны к аналогичному переходному процессу кальция, вызываемому внеклеточным АТФ. Мы ожидаем, что улучшенное разрешение, обеспечиваемое датчиком пирувата, будет представлять практический интерес для фундаментальных и прикладных исследователей, интересующихся функцией митохондрий.

Образец цитирования: San Martín A, Ceballo S, Baeza-Lehnert F, Lerchundi R, Valdebenito R, Contreras-Baeza Y, et al. (2014) Визуализация митохондриального потока в отдельных клетках с помощью датчика FRET для пирувата.PLoS ONE 9 (1): e85780. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0085780

Редактор: Карл-Вильгельм Кох, Университет Ольденбурга, Германия

Поступила: 20 сентября 2013 г .; Одобрена: 5 декабря 2013 г .; Опубликован: 21 января 2014 г.

Авторские права: © 2014 San Martín et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа частично финансировалась за счет совместного гранта CONICYT-Chile и Deutsche Forschungsgemeinschaft Л. Фелипе Барросу и Иоахиму В. Дейтмеру (DFG-12, DE 231 / 25-1). Centro de Estudios Científicos (CECs) финансируется правительством Чили через Базовую программу финансирования центров передового опыта компании CONICYT. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Введение

Митохондрии являются основными генераторами клеточного АТФ, а также важными участками деградации и синтеза метаболитов. Митохондрии участвуют в производстве и детоксикации активных форм кислорода, в регуляции передачи сигналов кальция, апоптоза, некроза и аутофагии, играя роль в дегенеративных заболеваниях и прогрессировании рака. Функция митохондрий может быть достигнута с высоким разрешением с помощью флуоресцентной микроскопии путем оценки митохондриального кальция, потенциала, pH, автофлуоресценции NAD (P) H и т. Д.Однако эти параметры только косвенно связаны с метаболизмом митохондрий и могут быть неоднозначными: например, более высокая концентрация кальция в митохондриях и деполяризация митохондрий могут наблюдаться, когда клетки активны, но также и когда клетки умирают [1].

Скорость митохондриального метаболизма, то есть скорость метаболизма, обычно оценивается как скорость потребления кислорода, измеряемая в популяциях клеток или очищенных митохондриях с помощью внеклеточных кислородных электродов или датчиков.В качестве альтернативы, митохондриальный метаболизм можно оценить с помощью изотопно-меченных метаболитов, которые обнаруживаются как CO 2 , высвобождаемого в среду, или путем постоянного обогащения изотопной метки промежуточными метаболитами, которые могут быть обнаружены неинвазивно с помощью ЯМР. спектроскопия. Общим ограничением этих методов является потребность в популяциях клеток, что затрудняет определение вклада отдельных типов клеток в сложные ткани, опухоли или культуры клеток.Кроме того, некоторые существующие методы имеют низкое временное разрешение, что исключает изучение быстрых метаболических явлений, которые, как считается, происходят в головном мозге. Многое из того, что известно о функции и дисфункции митохондрий, получено в результате изучения очищенных органелл [1], но митохондрии не работают изолированно, и их функция, как известно, модулируется цитозольными молекулами и взаимодействиями с другими органеллами, которые теряются во время процедуры очистки.

В этой статье мы представляем метод оценки митохондриального потока в отдельных интактных клетках в режиме реального времени с использованием флуоресцентной микроскопии.Метод основан на новом генетически закодированном наносенсоре FRET для пирувата, который, кроме того, позволяет оценивать внутриклеточные уровни пирувата, клеточный транспорт пирувата и скорость продукции гликолитического пирувата.

Результаты

PdhR, окруженный парой FRET mTFP-Венера, сообщает о концентрации пирувата

PdhR — бактериальный регулятор транскрипции, который контролирует экспрессию гена пируватдегидрогеназы в ответ на пируват [2]. Чтобы создать наносенсор FRET для пирувата, PdhR из Escherichia coli (рис.1A) был выбран в качестве каркасного белка и фланкирован флуоресцентными белками mTFP и Venus в качестве соответствующего донора и акцептора FRET (рис. 1B). Были созданы четыре варианта гибридного белка с линкерами и без них. Соответствующие последовательности ДНК и аминокислот показаны на рисунке S1. Соотношение между интенсивностью флуоресценции mTFP и Венеры (R) измеряли в отсутствие и в присутствии 5 мМ пирувата. Зависимое от пирувата изменение соотношения (ΔR) четырех вариантов показано на рис.1С. Вариант с наибольшим откликом был назван Pyronic (Pyruvate Optical Nano Indicator from CECs) и охарактеризован более подробно. Как показано на фиг. 2A, воздействие пирувата на Pyronic вызывало увеличение интенсивности флуоресценции mTFP и уменьшение интенсивности флуоресценции Венеры, что согласуется с уменьшением эффективности FRET. Воздействие возрастающих концентраций пирувата показало, что Pyronic реагирует на пируват от 10 мкМ до 1 мМ, с K D , равным 107 ± 13 мкМ, и максимальным изменением коэффициента флуоресценции примерно на 20% (рис.2Б). Этот K D в микромолярном диапазоне согласуется с анализами задержки геля с очищенным PdhR [2]. На восприятие пирувата существенно не влиял pH в физиологическом или патологическом диапазоне (рис. 2C). На сенсор не влияли миллимолярные уровни лактата, ацетата, глутамата, бета-гидроксибутирата, глюкозы, альфа-оксоглутарата, сукцината или малата, ни в отсутствие (рис. 2D), ни в присутствии пирувата (рис. 2E – F). Обнаружение пирувата не зависело от окислительно-восстановительного отношения (рис.2H). Небольшой эффект наблюдался для цитрата при 1 мМ, но не при 100 мкМ, концентрация, наблюдаемая в цитозоле млекопитающих [3] — [5] (рис. 2D и 2G). Оксалоацетат в концентрации 1 мМ вызывал небольшое изменение коэффициента флуоресценции, но не при 100 мкМ, концентрация значительно выше низкого микромолярного уровня, присутствующего в клетках млекопитающих [3] (фиг. 2D и 2F).

Рис. 1. Pyronic, датчик пирувата FRET, основанный на регуляторе транскрипции PdhR.

A. 3D-структура PdhR из Escherichia coli , предсказанная по аналогии с LldR и FadR, (http: // www.fiserlab.org/servers_table.htm). B. Конструкция сенсора: регулятор транскрипции PdhR был зажат между флуоресцентными белками mTFP (донор FRET) и Венерой (акцептор FRET) с синтетическими пептидами, разделяющими белки (синий и оранжевый линкеры). C. Влияние 5 мМ пирувата на коэффициент флуоресценции четырех вариантов сенсора пирувата. Наиболее чувствительная из конструкций (стрелка) была названа Pyronic и использовалась для дальнейшей характеристики и измерения клеток.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0085780.g001

Рис. 2. In vitro характеристика Pyronic.

A. Спектры излучения в отсутствие и в присутствии 1 (при возбуждении 462 нм) измеряли при возрастающих концентрациях пирувата. Непрерывная линия соответствует наилучшему соответствию прямоугольной гиперболы данным со значением кажущейся константы диссоциации (K D ) 107 ± 13 мкМ и максимальным изменением коэффициента флуоресценции (ΔRmax) 24 ± 0,7%. C. Кривые зависимости реакции от дозы пирувата измеряли при указанных значениях pH.Непрерывная линия показывает наилучшее соответствие прямоугольной гиперболы данным при pH 7,2. D. Ответ Pyronic на панель метаболитов в концентрации 1 мМ, если не указано иное. E-F-G. Кривые зависимости реакции от дозы пирувата измеряли в отсутствие и в присутствии группы метаболитов в концентрации 1 мМ, если не указано иное. Показаны наилучшие соответствия прямоугольных гипербол контрольным данным. Кривые зависимости реакции от дозы пирувата измеряли в восстановленной среде (0,2 мкМ НАДН), окисленной среде (100 мкМ НАД + ) или промежуточной среде (0. 2 мкМ НАДН плюс 100 мкМ НАД + ). Показано наилучшее соответствие прямоугольной гиперболы последней.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0085780.g002

Pyronic сообщает о цитозольных концентрациях пирувата в клетках млекопитающих.

Экспрессируется в клетках, нейронах и астроцитах HEK293, Pyronic показал ожидаемое цитозольное распределение (фиг. 3A). Наблюдался быстрый ответ на изменения внеклеточного пирувата, достигающий насыщения в миллимолярном диапазоне (рис.3Б). Максимальное изменение коэффициента флуоресценции сенсора, экспрессируемого в клетках, составило около 40%, в два раза больше, чем наблюдаемое in vitro (см. Рис. 2), явление, ранее отмеченное для структурно родственного лактатного наносенсора [6]. Коэффициент флуоресценции не реагировал на вывод внеклеточной глюкозы (рис. S2A), что указывает на то, что в отсутствие внеклеточного пирувата цитозольный пируват находится ниже диапазона обнаружения сенсора (т.е. <10 мкМ, см. Рис. 2). Этот низкий уровень цитозольного пирувата согласуется с низким уровнем внутриклеточного лактата, измеренным в культивируемых клетках в тех же условиях [6], и может быть объяснен потерей пирувата и лактата через высокопроницаемые переносчики монокарбоцилата (MCT).Экспрессия в зрелых астроцитах гиппокампа с помощью стереотаксической инъекции астроцит-специфического аденовирусного вектора с последующим приготовлением острых срезов ткани выявила типичный фрактальный аспект протоплазматических астроцитов, обнаруженный in situ (рис. 3C). В отличие от астроцитов в культуре, in situ астроцитов показали снижение цитозольного пирувата при удалении внеклеточной глюкозы (рис. 3D). Это открытие можно объяснить присутствием MCT4 в зрелых астроцитах [7], изоформы, которая имеет гораздо более низкое сродство к пирувату, чем MCT1, изоформа, обнаруживаемая в астроцитах в культуре [8] — [10].Соответственно, астроциты in situ были намного медленнее, чем культивируемые астроциты, при захвате и высвобождении пирувата (рис. 3D). Предостережение заключается в том, что аденовирусные векторы могут вызывать местное воспаление при использовании in vivo . Для систематического исследования сенсор можно вместо этого экспрессировать с помощью аденоассоциированных вирусных векторов или трансгенеза. Если это будет подтверждено, наличие у взрослых астроцитов проницаемости для пирувата подтвердит гипотезу о том, что астроциты переносят энергию к нейронам, экспортируя лактат в обмен на пируват [11], [12].Как и ожидалось при острой стимуляции гликолиза [13] и продукции лактата [6], взрослые астроциты быстро заполняются пируватом после митохондриального ингибирования блокатором комплекса IV азидом натрия (рис. 3D).

Рисунок 3. Визуализация пирувата в клетках млекопитающих.

A. Распределение Pyronic в клетках HEK293, астроцитах и ​​нейронах в культуре. Масштабные линейки соответствуют 20 мкм. B. Отклик соотношения флуоресценции на импульсы 0,05, 0,1, 0,25 0,5 и 1 мМ пирувата в клетках HEK293. С.Распределение Pyronic в протоплазматических астроцитах в срезе гиппокампа. Полоса соответствует 20 мкм. D. Ответ астроцита, обозначенного стрелкой в ​​C, на истощение запасов глюкозы, импульсы 10 мМ пирувата и воздействие 5 мМ азида натрия.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0085780.g003

Воспользовавшись возможностью измерения крайних точек кривой насыщения в каждой ячейке путем последовательных инкубаций с пируватом и без него, датчик был откалиброван с использованием значение K D оценивается как in vitro , согласно уравнению пирувата (мМ) = (0.107 * ΔR) / (ΔRmax — ΔR). На рисунке S2B показан пример преобразования данных отношения флуоресценции в концентрацию пирувата с использованием этого протокола двухточечной калибровки. Подтверждая предыдущие результаты с лактатным наносенсором FRET [6], захват пирувата клетками HEK293 полностью ингибировался специфическим ингибитором MCT AR-C155858 и частично неспецифическим ингибитором MCT флоретином (рис. S3). Поэтому AR-C155858 был выбран в качестве предпочтительного блокатора MCT для протоколов остановки ингибитора, описанных ниже.

Производство гликолитического пирувата

Внутриклеточная концентрация пирувата определяется динамическим балансом между производством пирувата путем гликолиза и потреблением пирувата митохондриями, LDH и MCT (рис. 4A). Ингибирование оттока пирувата и лактата путем применения блокатора MCT AR-C155858 в присутствии глюкозы приводило к прогрессивному накоплению внутриклеточного пирувата, который ингибировался депривацией глюкозы (рис. 4B-C), подтверждая гликолитическое происхождение пирувата.Таким образом, этот протокол остановки ингибитора обеспечивает стратегию для оценки гликолиза в точке его выхода. В соответствии с временной зависимостью MCT-блокады, описанной ранее [14], между нанесением AR-C155858 и началом накопления пирувата наблюдалась задержка около 2 минут.

Рисунок 4. Оценка гликолитического и митохондриального потоков.

A. Пул цитозольного пирувата определяется выработкой гликолита, потреблением митохондрий и преобразованием в лактат, который затем покидает клетку через МСТ.Незначительное количество пирувата также может быть потеряно через МСТ. B. Накопление пирувата в клетке HEK293, подвергнутой воздействию блокатора MCT AR-C155858 (1 мкМ) в присутствии 2 мМ глюкозы (контроль) или в клетке, лишенной глюкозы в течение 30 мин. C. Влияние увеличения времени депривации глюкозы на скорость накопления пирувата, индуцированного 1 мкМ AR-C155858 в клетках HEK293. D. При использовании пирувата в качестве исключительного топлива цитозольный пул пирувата определяется только притоком через МСТ и потреблением митохондрий.Клетки E. HEK293 лишались глюкозы в течение 1 часа, а затем подвергались воздействию 0,3 мМ пирувата в отсутствие (контроль) или в присутствии 5 мМ азида натрия. Добавление 1 мкМ AR-C155858 приводило к снижению внутриклеточной концентрации пирувата только в контрольной клетке. F. Краткое изложение влияния 5 мМ азида натрия на скорость потребления митохондриального пирувата, измеренного, как описано в E.

.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0085780.g004

Измерение потребления митохондриального пирувата

Для того, чтобы оценить митохондриальный поток, клетки HEK293, экспрессирующие Pyronic, сначала были истощены по глюкозе в течение 1 часа, состояние, при котором продукция гликолитического пирувата незначительна (рис.4С). Воздействие пирувата на клетки, лишенные глюкозы, приводило к более простому динамическому равновесию между притоком из внеклеточного пространства через MCT и клиренсом из-за потребления пирувата митохондриями (рис. 4D). Мы наблюдали, что внутриклеточный пируват стабилизировался на уровне примерно 30-50% от внеклеточного пирувата. Например, в клетках, показанных на фиг. 4E, залитых 0,3 мМ пирувата, внутриклеточный пируват колебался около 0,1 мМ. Прерывание стационарного состояния из-за блокады МСТ привело к устойчивому снижению цитозольного пирувата до полного истощения пула.Скорость клиренса пирувата была постоянной в большей части диапазона концентраций, что свидетельствовало о том, что переносчики пирувата были насыщенными (фиг. 4E). Ингибирование митохондриального окислительного фосфорилирования азидом натрия блокирует клиренс пирувата (рис. 4E – F), подтверждая, что этот клиренс обусловлен метаболизмом митохондрий.

Модуляция митохондриального потока в интактных клетках головного мозга

Высокое пространственное и временное разрешение, обеспечиваемое флуоресцентной микроскопией, было использовано для поиска быстрых метаболических событий в смешанных культурах нейронов и астроцитов, в условиях, в которых оба типа клеток лучше всего дифференцируются как морфологически, так и метаболически [15].Прежде всего, культуры стимулировали полевой стимуляцией коротким тета-взрывом, протокол, имитирующий умеренные уровни активности гиппокампа [16]. Эффективность тета-взрыва для активации нейронов была подтверждена сильным переходным процессом кальция (рис. 5А). Измерения с помощью наносенсора глюкозы [17] не показали изменений в нейрональном пуле глюкозы во время или после тета-всплеска (рис. 5B), пул, который, как известно, быстро мобилизуется в ответ на изменение pH [18]. Напротив, датчик пирувата показал, что в течение нескольких секунд после первой серии импульсов скорость митохондриального метаболизма в нейронах увеличилась более чем на 300% (рис.5C и 5D). В астроцитах базальная скорость потребления митохондриального пирувата была ниже, чем в нейронах, и не стимулировалась большим транзиентом кальция, вызванным внеклеточным АТФ (фиг. 5E и 5F). Контрольные эксперименты показали, что 1 мкМ AR-C155858 ингибирует нейрональный и астроцитарный транспорт пирувата более чем на 95% (данные не показаны). Как и в случае с клетками HEK293, клиренс пирувата как в астроцитах, так и в нейронах был линейным при низких уровнях пирувата (фиг. 5C и 5E), демонстрируя высокоаффинное поглощение пирувата митохондриями.Диссоциация между метаболизмом пирувата и глюкозы в первые моменты активации поддерживает представление о том, что активные нейроны преимущественно получают энергию от лактата, а не от глюкозы [19]. Отсутствие реакции митохондрий астроцитов показывает, что кальциевого сигнала недостаточно для стимуляции метаболизма митохондрий, и предполагает, что астроциты не могут вносить значительный вклад в снижение содержания кислорода, которое следует за активацией мозга.

Рис. 5. Ранние метаболические события во время активации клеток мозга.

A. Нагруженные Fluo-4 нейроны гиппокампа стимулировали тета-взрывом, как описано в разделе «Материалы и методы». Данные представляют собой средние значения 8 ячеек. B. Влияние тета-всплеска на внутриклеточную глюкозу в 3 нейронах. Столбцы иллюстрируют данные из 8 ячеек в трех экспериментах. C. Влияние тета-всплеска на скорость потребления митохондриального пирувата в нейроне, измеренное в присутствии 0,4 мМ пирувата и 1 мкМ AR-C155858. D. Объединенные данные от 9 нейронов в пяти экспериментах, подобных показанному на C. Столбцы суммируют скорости в 30-секундные периоды до и после тета-всплеска.E. Влияние 5 мкМ АТФ на потребление митохондриального пирувата астроцитом, измеренное в присутствии 0,4 мМ пирувата и 1 мкМ AR-C155858. Также показан кальциевый ответ на 5 мкМ АТФ в отдельном эксперименте. Данные — это средства из 8 ячеек. F. Объединенные данные по пирувату из 40 астроцитов в эксперименте, подобном показанному на E. Столбцы суммируют скорости за 2 минуты до и после применения АТФ в 40 клетках в пяти экспериментах.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0085780.g005

Обсуждение

Митохондрии возбуждают. Динамика деления-слияния, динамика кальция, апоптоз, аутофагия, взаимодействие с эндоплазматическим ретикулумом, роль в раке и дегенеративных заболеваниях и так далее. Многие из этих процессов можно проследить в режиме реального времени с помощью флуоресцентной микроскопии, но не существует практического аналога основной биологической функции митохондрий — метаболизма. Здесь мы представляем метод количественной оценки митохондриального метаболизма в интактных клетках с помощью флуоресцентной микроскопии.

Сенсор пирувата реагировал на пируват в диапазоне от 10 мкМ до 1 мМ, охватывая физиологический диапазон, измеренный в плазме и тканях млекопитающих, и было показано, что он нечувствителен к pH, окислительно-восстановительному соотношению и нескольким тесно связанным цитозольным и митохондриальным метаболитам. Пироник может быть добавлен к появляющемуся списку сенсоров флуоресцентных метаболитов, которые были проверены на клетках млекопитающих, которые включают зонды на глюкозу [17], АТФ [20], [21], NADH / NAD + [12], [22]. ] и лактат [6].Одной из положительных характеристик, связанных с Pyronic, является то, что он делает возможной неинвазивную калибровку, которая позволяет оценивать концентрацию в каждом эксперименте, не прибегая к жестким процедурам повышения проницаемости клеток. Важной характеристикой сенсора пирувата является то, что его можно комбинировать с транспортными блокаторами для получения количественных оценок метаболического потока.

Золотым стандартом митохондриальной функции является респирометрия, метод, давно используемый для клеток в суспензии и изолированных митохондрий. Успешное усовершенствование респирометрии было недавно введено для прикрепленных клеток в многолуночном формате [23]. Датчик пирувата также измеряет митохондриальную активность, но отличается от респирометрии масштабом, сильными сторонами и ограничениями. Респирометрия измеряет скорость митохондрий независимо от фактического метаболизируемого субстрата, например пируват, жирные кислоты, кетоны и т. д., тогда как нынешняя методика специфична для пирувата. Это ограничение может быть использовано для изучения митохондриального переносчика пирувата MPC [24], [25], который недавно был идентифицирован как мишень для тиазолидиндионов, основного класса гипогликемических препаратов [26].В клетках, экспрессирующих анаплеротический фермент пируваткарбоксилазу, наносенсор будет сообщать сумму потоков через пируватдегидрогеназу и через пируваткарбоксилазу, пути, которые могут быть далее проанализированы с помощью ингибиторов ферментов и / или подходов нокдауна. Нормальные и больные ткани неоднородны с точки зрения экспрессии и распределения метаболических ферментов [27], что подразумевает метаболические концентрации и потоки, специфичные для клеточного типа. Отличительным преимуществом наносенсора пирувата является то, что он обеспечивает разрешение отдельных клеток, предоставляя доступ к определенным типам клеток в сложных культурах и тканях.Даже в популяциях моноклональных клеток, культивируемых в идентичных условиях, существует регулируемая межклеточная изменчивость, которая может быть использована для раскрытия новых молекулярных механизмов [28]. Еще одно преимущество — высокое временное разрешение, открывающее доступ к быстрым явлениям. Эти две функции были объединены в нашем исследовании с обнаружением быстрых метаболических событий в зрелых нейронах в присутствии астроцитов. Общее ограничение настоящего метода состоит в том, что датчик необходимо вводить в клетки, что делает его непрактичным для исследования свежеизолированных клеток или тканей в клиническом контексте, что легко происходит при респирометрии. Специфическим ограничением измерения митохондриального потока является то, что оно требует отсутствия глюкозы, фактора, который, возможно, может повлиять на функцию митохондрий. В целом метод сенсора пирувата и респирометрия кажутся взаимодополняющими, поскольку они исследуют отдельные аспекты функции митохондрий и имеют разные ограничения.

Потенциал сенсора для решения конкретных вопросов был проиллюстрирован на примере клеток, астроцитов и нейронов HEK293. Фундаментальная проблема биоэнергетики касается управления метаболизмом митохондрий.Эксперименты в изолированных митохондриях идентифицировали несколько кандидатов, включая цитозольный Ca 2+ , митохондриальный Ca 2+ , соотношение АТФ / АДФ, доступность пирувата и активность митохондриального переносчика пирувата [1], [24], [25] ], [29], [30]. Постоянство скорости клиренса пирувата, которое мы наблюдали, показывает, что митохондриальные транспортеры пирувата насыщены на физиологических уровнях пирувата, и что доступность пирувата не ограничивает скорость и вряд ли может контролировать митохондриальный метаболизм в интактных клетках.Это важное наблюдение, поскольку в литературе нет единого мнения о сродстве митохондрий к пирувату. Измерения в изолированных органеллах оценили значения K m для поглощения митохондриальным пируватом на расстоянии 5 мкм и 1 мМ [31] — [33]. В мозге есть и другие вопросы, которые необходимо решить, например, насколько быстро реагируют митохондрии на потребность в энергии и каковы относительные роли нейронов и астроцитов. В астроцитах мы обнаружили, что значительный переходный процесс кальция, вызванный АТФ, не смог стимулировать митохондриальный поток, в то время как аналогичный переходный процесс кальция, вызванный в нейронах умеренной электрической стимуляцией, вызвал сильную стимуляцию потребления пирувата в течение нескольких секунд.Электростимуляция не влияла на уровень глюкозы. Специфическое измерение потребления глюкозы отдельными нейронами с помощью датчика глюкозы FRET [13] может помочь разделить возможные вклады транспорта и метаболизма глюкозы. Наши результаты важны по нескольким причинам: они подразумевают, что нейроны ответственны за резкое падение концентрации кислорода, которое следует за нейронной активацией in situ ; они обеспечивают метаболическое объяснение перерегулирования митохондриальной флуоресценции NAD (P) H, которое следует за активацией нейронов [34]; и они показывают, что активные нейроны претерпевают существенное увеличение потока митохондриального пирувата без видимых изменений в метаболизме глюкозы, оставляя лактат в качестве основного источника энергии для активных нейронов [19], [35].Отсутствие ответа в астроцитах подтверждает роль митохондриально-специфических факторов, которые обусловливают ответ на кальций, таких как митохондриальные переносчики аралар и цитрин [30]. Дальнейшее понимание краткосрочной регуляции митохондриального потока с помощью сигналов кальция в нейронах и астроцитах может потребовать более подробной характеристики, включая кривые доза-ответ, использование фармакологических блокаторов и агонистов рецепторов, а также количественное определение кальция с помощью ратиометрических красителей. Значительная проницаемость для пирувата, обнаруженная в астроцитах в срезах гиппокампа, стала неожиданностью, потому что изоформа MCT, присутствующая в астроцитах (MCT4), проявляла чрезвычайно низкое сродство к пирувату при экспрессии в ооцитах [8], [9].В то время как природа пируватного пути в зрелых астроцитах еще предстоит исследовать, его присутствие обеспечивает недостающее звено для предложенного астроцит-нейронального окислительно-восстановительного конвейера [11], [12].

Наш пируватный сенсор может также представлять интерес для биотехнологии, области исследований, требующей методов высокого разрешения [36]. Пируват представляет собой метаболический узел, расположенный на перекрестке гликолиза и митохондриального метаболизма, и является стартовым метаболитом для множественных путей клеточного биосинтеза.Пируват представляет собой молекулу, представляющую промышленный интерес, поскольку в настоящее время он производится как диетическая добавка, добавка для контроля веса и антиоксидант, а также как сырье, широко применяемое в химической, фармацевтической и агрохимической промышленности. Стандартные методы измерения пирувата основаны на ферментативных реакциях, которые отслеживаются с помощью фотометрических, амперометрических, ВЭЖХ и других методов. Относительные преимущества датчика в этом контексте заключаются в том, что он не потребляет пируват и не требует разрушения образца.Он также чувствителен, поскольку на сегодняшний день является единственным методом, способным обнаруживать мельчайшие количества пирувата, присутствующего в одной ячейке. Будучи генетически закодированным, датчик пирувата может производиться бактериями в больших количествах по невысокой цене.

Таким образом, мы представили здесь генетически закодированный датчик FRET для пирувата, а также методы количественной оценки концентрации пирувата, транспорта пирувата, продукции пирувата и потребления митохондриального пирувата в интактных отдельных клетках.Продемонстрировав свой потенциал, эти методы показали, что астроциты обладают значительной поверхностной проницаемостью для пирувата, что митохондрии не ограничены доступностью субстрата и что переходный процесс кальция быстро сопровождается активацией митохондриального потока в нейронах, но не в астроцитах. Мы ожидаем, что эти методы представляют большой практический интерес.

Материалы и методы

Стандартные реагенты и ингибиторы были приобретены у Sigma. AR-C155858 был приобретен у Haoyuan Chemexpress (Шанхай).

Конструкция датчика пирувата

Бактериальная геномная ДНК была выделена с использованием набора для выделения EZNA (Omega bio-tek). Ген PdhR из E. coli амплифицировали со специфическими праймерами. Чтобы упростить стратегию клонирования, сайт HindIII был удален путем введения молчащей однонуклеотидной мутации. Для облегчения субклонирования последовательностей PhdR сайты рестрикции AflII и KpnI были соответственно введены на 3′- и 5′-конце ампликона. Реакции ПЦР проводили с использованием ДНК-полимеразы горячего старта KOD (Novagen), а их продукты проверяли секвенированием (Macrogen. Inc). Четыре варианта сенсора пирувата были созданы с использованием технологии рекомбинационного клонирования Gateway® (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, были сконструированы два плазмидных вектора: вектор назначения и вектор входа. Вектор-адресат (pDEST01) содержал основной вектор pRSET-B, в котором последовательности ДНК, кодирующие полигистидиновый хвост, mTFP и Венеру, были клонированы ниже бактериального промотора Т7. Кассета рекомбинации, амплифицированная из pDEST14 с помощью ПЦР, была вставлена ​​между последовательностями для mTFP и Venus.Вектор входа был сконструирован с использованием вектора pCR®8 / GW / TOPO TA путем клонирования последовательностей, соответствующих полному PdhR из E. coli (pENTPdhR01). Наконец, четыре экспрессионных вектора были сгенерированы реакцией LR-рекомбинации между вектором-адресатом pDEST01 и входным вектором pENTPdhR01 с последующим условным удалением линкера между mTFP и PdhR или линкера между PdhR и Венерой путем переваривания экспрессионных векторов рестрикционными ферментами. KpnI и AflII.

Очистка белка

Четыре варианта сенсора пирувата были трансформированы в компетентный E. coli BL21 (DE3). Единственную колонию инокулировали в 100 мл среды LB со 100 мг / мл ампициллина (без IPTG) и встряхивали в темноте в течение 2–3 дней. Клетки собирали центрифугированием при 5000 об / мин (4 ° C) в течение 10 мин и разрушали ультразвуком (Hielscher Ultrasound Technology) в 5 мл трис-HCl буфера pH 8,0. Бесклеточный экстракт получали центрифугированием при 10000 об / мин (4 ° C) в течение 1 часа и последующей фильтрацией супернатанта (0.45 мкм). Белки очищали с использованием никелевой смолы (His Bin® от Novagen) в соответствии с рекомендациями производителя. Элюированные белки инкубировали в течение ночи при 4 ° C, количественно определяли с помощью метода Biuret и хранили при -20 ° C в 20% глицерине. Вариант, который показал наибольшее изменение коэффициента флуоресценции, который мы назвали Pyronic (Pyruvate Optical Nano-Indicator from CECs), был клонирован в pcDNA3. 1 (-) для экспрессии в эукариотических клетках с использованием сайтов рестрикции BamHI и HindIII.

Животные и культуры клеток

Смешанные F1 (C57BL / 6J x CBA / J, культуры) или sv / 129 самцов мышей (стереотаксис) содержались в помещении для животных в условиях отсутствия специфических патогенов (SPF) при комнатной температуре 20 ± 2 ° C, в 12/12 ч цикл свет / темнота со свободным доступом к пище и воде.Процедуры были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Centro de Estudios Científicos. Смешанные корковые культуры (новорожденные в возрасте 1-3 дней) и культуры гиппокампа (17,5-дневные эмбрионы) готовили, как подробно описано ранее [13]. Астроциты в корковых культурах использовали на 7–10-й день, а нейроны в культурах гиппокампа — на 14-17-й день. Клетки HEK293 получали из Американской коллекции типовых культур и культивировали при 37 ° C в 95% воздуха / 5% CO 2 в DMEM / F12 10% фетальной бычьей сыворотке.Культуры трансфицировали при 60% слияния с использованием липофектамина 2000 (Gibco) или, альтернативно, подвергали воздействию 5 × 10 6 БОЕ Ad Pyronic или Ad FLII 12 Pglu600 µΔ6 (серотип 5, изготовленный на заказ Vector Biolabs) и исследовали после 24–72 ч.

Стереотаксис и подготовка острых срезов гиппокампа

Двухмесячных мышей-самцов мышей Sv / 129 анестезировали в стерильных условиях с помощью внутрибрюшинной инъекции 2% авертина и помещали в стереотаксическую рамку (Just for Mice ™, Stoelting 51725).Температуру тела поддерживали на уровне 37 ° C с помощью терморегулятора ATC (World Precision Instruments). После бритья кожу анестезировали 4% лидокаином и разрезали ножницами. В черепе с помощью микробура (Fine Science Tools) проделали круглое отверстие диаметром 0,3 мм. Кончик иглы 34 размера, соединенной со шприцем Гамильтона полиэтиленовым катетером, располагался в гиппокампе на 2 мм кзади от Bregma, на 1,5 мм медиолатерально и на 1,8 мм ниже пиальной поверхности. Ad Pyronic (1.85 × 10 6 ( БОЕ, разведенных в 2 мкл буфера PBS с добавлением 1% BSA) вводили с помощью шприцевого насоса Fusion 100 (Chemyx Inc.). После удаления иглы кожу анестезировали 4% лидокаином и зашивали. Через 3–4 недели срезы гиппокампа готовили следующим образом. Животных умерщвляли смещением шейного отдела позвоночника, удаляли голову и осторожно извлекали мозг. Коронковые срезы головного мозга толщиной 200 мкм получали с использованием вибратома (1000 Plus Sectioning System, Vibratome®).Во время срезов мозг содержался в холодном буфере (мМ): 125 NaCl, 2,5 KCl, 1,25 NaH 2 PO 4 , 26 NaHCO 3 , MgCl 2 , 0,5 CaCl 2 и 10 глюкозы. ) с газом 95% O 2 /5% CO 2 , pH 7,4. Срезы гиппокампа переносили во второй буфер (мМ): 125 NaCl, 2,5 KCl, 1,25 NaH 2 PO 4 , 26 NaHCO 3 , 1 MgCl 2 , 1,5 CaCl 2 , 0,5 лактата и 10 глюкоза) с 95% O 2 /5% CO 2 , pH 7.4, при комнатной температуре. Во время экспериментов срезы были суперслиты с 95% O 2 /5% CO 2 -газированным буфером KRH (мМ): 126 NaCl, 3 KCl, 1,25 NaH 2 PO 4 , 1,25 CaCl 2 , 1,25 MgCl 2 , 10 глюкозы и 26 NaHCO 3 , pH 7,4.

Измерения флуоресценции

Очищенные никелем белки ресуспендировали при 100 нМ во внутриклеточном буфере, содержащем (мМ): 10 NaCl, 130 KCl, 1,25 MgSO 4 и 10 HEPES, pH 7.0 и измеряли с помощью анализатора-ридера для микропланшетов (EnVision, PerkinElmer). Белки возбуждали при 430 нм, и интенсивность флуоресцентного излучения mTFP и Венеры регистрировали при 485 нм и 528 нм, соответственно. Отношение между выбросами использовалось для характеристики датчиков. Спектры излучения получали при возбуждении 430 нм с окнами 2 нм. Клетки были визуализированы при комнатной температуре (22-25 ° C) в 95% воздуха / 5% CO 2 -газированный KRH-бикарбонатный буфер следующего состава (в мМ): 112 NaCl, 1.25 CaCl 2 , 1,25 MgSO 4 , 1-2 глюкозы, 10 HEPES, 24 NaHCO 3 , pH 7,4, с 3 мМ KCl (клетки мозга) или 5 мМ KCl (HEK293) с использованием вертикального конфокального прибора Olympus FV1000 микроскоп, оснащенный водно-иммерсионным объективом с 20-кратным увеличением (NA 1.0) и твердотельным лазером с длиной волны 440 нм. В качестве альтернативы, клетки были визуализированы с помощью Olympus IX70 или микроскопа Olympus BX51, оборудованного 40-кратным масляным иммерсионным объективом (NA 1,3) или 20-кратным водным иммерсионным объективом (NA 0,95). Микроскопы были оснащены монохроматорами Cairn (Faversham, UK) и камерой Hamamatsu Orca, управляемой программным обеспечением Kinetics, или камерой Rollera, управляемой программным обеспечением Metafluor, соответственно.Для измерения соотношения наносенсоров клетки возбуждали на длине волны 430 нм в течение 0,2–0,8 с. Излучение было разделено с помощью Cairn Optosplit, оснащенного полосовыми фильтрами на 480 ± 20 (mTFP) и 535 ± 15 нм (Venus). Соотношение между mTFP и Венерой использовалось для оценки концентрации пирувата в соответствии с процедурой калибровки, описанной в разделе «Результаты» (рис. S2). Внутриклеточную концентрацию глюкозы измеряли с помощью наносенсора FRET FLII 12 glu700 µΔ6, который имеет K D для глюкозы 660 ± 160 [17].

Электростимуляция

Смешанные культуры нейронов и астроцитов гиппокампа, выращенные на покровных стеклах толщиной 25 мм, стимулировали полевой стимуляцией с использованием камеры RC-21BRFS (Warner Instruments) и устройства WPI PRO-4. Импульсы (выход 50 мА) генерировались с помощью изолятора сильноточного стимула WPI A385, подключенного к зарядному устройству WPI A382. Протокол стимуляции, проиллюстрированный на рис. 5A, представлял собой короткий тета-всплеск, протокол, имитирующий умеренную активность гиппокампа [16]. Он состоит из двух последовательностей импульсов, разделенных 10 секундами.Каждая последовательность длится 1 секунду и состоит из двадцати импульсов длительностью 1 мс, разделенных на пять групп по четыре импульса.

Измерение кальция

Цитозольный кальций оценивался с помощью Fluo-4 (Invitrogen). Краситель загружали в форме AM (4 мкМ) в течение 30 минут при 37 ° C в буфере KRH без бикарбоната и добавляли 2 мМ глюкозы и 1 мМ лактата. После загрузки культуры переносили в стандартный KRH-бикарбонатный буфер и оставляли в покое еще на 15 мин перед измерениями.

Статистический анализ

Если не указано иное, эксперименты повторяли от трех до пяти раз, с 6–12 клетками в эксперименте. Планки погрешностей представляют SEM. Регрессионный и статистический анализ проводили с помощью компьютерной программы SigmaPlot (Jandel). Различия в средних значениях парных выборок оценивали с помощью t-критерия Стьюдента. Различия между более чем двумя группами оценивали с помощью одностороннего дисперсионного анализа рангов Краскела-Уоллиса с последующим тестом Даннса.Значения P <0,05 считались значимыми и отмечены звездочкой (*).

Вспомогательная информация

Рисунок S2.

Относится к Рис.2 . Двухточечная калибровка Pyronic в ячейках HEK293. A. Удаление глюкозы и лактата не оказало заметного влияния на коэффициент флуоресценции Pyronic, что указывает на то, что уровни пирувата в покое ниже чувствительности сенсора (т.е. <10 мкМ). Показан ответ на 1 мМ пируват.Данные представляют собой средние значения ± SEM для 8 ячеек. B. Клетку последовательно подвергали воздействию 1 мМ и 0,4 мМ пирувата. На нижней панели показано соотношение флуоресценции, где R 0 — это соотношение в отсутствие пирувата, а ΔR max — разница между R 0 и максимальным соотношением, оцененным в 1 мМ пирувата. Значение отношения в каждый момент времени минус R 0 , ΔR, было преобразовано в концентрацию пирувата (мМ, верхняя панель) с использованием измеренного ΔR max и K D , оцененного как in vitro (107 мкМ, см. рис.2Б).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0085780.s002

(DOC)

Рисунок S3.

Относится к Рис.4 . Ингибирование транспорта пирувата в клетках HEK293. A. Временной ход отношения пироновой флуоресценции в отдельной клетке, последовательно подвергнутой воздействию 1 мМ пирувата, 1 мМ пирувата в присутствии 50 мкМ флоретина (5 мин преинкубации) и 1 мМ пирувата в присутствии 1 мкМ AR-C155858 (Предварительная инкубация 5 мин). Б.Те же данные, что и в А, выраженные как концентрация пирувата. C. Резюме 24 клеток в трех отдельных экспериментах. Среднее ± SEM.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0085780.s003

(DOC)

Благодарности

Мы благодарим доктора Карен Эверетт за критическое прочтение рукописи.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: ASM SC LFB. Проведены эксперименты: ASM SC FB RL RV YC KA. Проанализированы данные: ASM SC FB RL RV YC KA LFB.Написал статью: АСМ ЛФБ.

Ссылки

  1. 1. Brand MD, Nicholls DG (2011) Оценка митохондриальной дисфункции в клетках. Biochem J 435: 297-312 BJ20110162 [pii]; 10.1042 / BJ20110162 [doi].
  2. 2. Quail MA, Guest JR (1995) Очистка, характеристика и механизм действия PdhR, репрессора транскрипции оперона pdhR-aceEF-lpd Escherichia coli. Мол микробиол 15: 519–529.
  3. 3. Siess EA, Brocks DG, Wieland OH (1978) Распределение метаболитов между цитозольным и митохондриальным компартментами гепатоцитов, выделенных от накормленных крыс.Hoppe Seylers Z Physiol Chem 359: 785–798.
  4. 4. Кауппинен Р.А., Хилтунен Дж.К., Хассинен И.Е. (1982) Компартментация цитрата в связи с регуляцией гликолиза и митохондриального трансмембранного протонного электрохимического градиента потенциала в изолированном перфузируемом сердце крысы. Biochim Biophys Acta 681: 286–291. 0005-2728 (82)

    -0 [pii].
  5. 5. Саха А.К., Лейбутт Д.Р., Дин Д., Ваввас Д., Себокова Е. и др. (1999) Цитрат и регуляция малонил-КоА в мышцах крысы in vivo.Am J Physiol 276: E1030 – E1037.
  6. 6. Сан-Мартин А., Себалло С., Руминот И., Лерчунди Р., Фроммер В. Б. и др. (2013) Генетически закодированный датчик лактата FRET и его использование для обнаружения эффекта Варбурга в отдельных раковых клетках. PLoS ONE 8: e57712
  7. 7. Ли Ю., Моррисон Б. М., Ли Ю., Ленгахер С., Фара М. Х. и др. (2012) Олигодендроглии метаболически поддерживают аксоны и способствуют нейродегенерации. Nature 487: 443–448 nature11314 [pii]; 10.1038 / nature11314 [doi].
  8. 8.Dimmer KS, Friedrich B, Lang F, Deitmer JW, Broer S (2000) Низкоаффинный транспортер монокарбоксилата MCT4 адаптирован к экспорту лактата в высоко гликолитические клетки. Biochem J 350, ч. 1: 219–27: 219–227.
  9. 9. Manning Fox JE, Meredith D, Halestrap AP (2000) Характеристика человеческого транспортера монокарбоксилата 4 подтверждает его роль в оттоке молочной кислоты из скелетных мышц. J Physiol 529 Pt 2: 285–293. PHY_1092 [pii].
  10. 10. Barros LF, Deitmer JW (2010) Обеспечение глюкозы и лактата синапсом.Brain Res Rev 63: 149–159.
  11. 11. Cerdan S, Rodrigues TB, Sierra A, Benito M, Fonseca LL, et al. (2006) Гипотеза окислительно-восстановительного переключения / окислительно-восстановительного взаимодействия. Neurochem Int 48: 523–530.
  12. 12. Hung YP, Albeck JG, Tantama M, Yellen G (2011) Визуализация цитозольного окислительно-восстановительного состояния NADH-NAD (+) с помощью генетически кодируемого флуоресцентного биосенсора. Cell Metab 14: 545–554 S1550-4131 (11) 00342-1 [pii]; 10.1016 / j.cmet.2011.08.012 [doi].
  13. 13. Bittner CX, Loaiza A, Ruminot I, Larenas V, Sotelo-Hitschfeld T. и др.(2010) Измерение скорости гликолиза с высоким разрешением. Фронт нейроэнергетики 2: 1–11
  14. 14. Ovens MJ, Davies AJ, Wilson MC, Murray CM, Halestrap AP (2010) AR-C155858 — мощный ингибитор транспортеров монокарбоксилата MCT1 и MCT2, который связывается с внутриклеточным сайтом, включающим трансмембранные спирали 7-10. Biochem J 425: 523–530 BJ20091515 [pii]; 10.1042 / BJ20091515 [doi].
  15. 15. Brix B, Mesters JR, Pellerin L, Johren O (2012) Оксид азота, полученный из эндотелиальных клеток, усиливает аэробный гликолиз в астроцитах через активацию гена-мишени, опосредованную HIF-1alpha.J Neurosci 32: 9727–9735 32/28/9727 [pii]; 10.1523 / JNEUROSCI.0879-12.2012 [doi].
  16. 16. Albensi BC, Oliver DR, Toupin J, Odero G (2007) Протоколы электрической стимуляции для синаптической пластичности гиппокампа и гипервозбудимости нейронов: они эффективны или актуальны? Exp Neurol 204: 1–13 S0014-4886 (06) 00642-X [pii]; 10.1016 / j.expneurol.2006.12.009 [doi].
  17. 17. Takanaga H, Chaudhuri B, Frommer WB (2008) GLUT1 и GLUT9 как основные участники притока глюкозы в клетки HepG2, идентифицированные с помощью высокочувствительного внутримолекулярного датчика глюкозы FRET.Biochim Biophys Acta 1778: 1091–1099.
  18. 18. Ruminot I, Gutiérrez R, Peña-Munzenmeyer G, Añazco C, Sotelo-Hitschfeld T, et al. (2011) NBCe1 опосредует острую стимуляцию астроцитарного гликолиза внеклеточным K + . J Neurosci 31: 14264–14271.
  19. 19. Pellerin L, Magistretti PJ (2012) Сладкие шестнадцать для ANLS. J Cereb Blood Flow Metab 32: 1152–1166 jcbfm2011149 [pii]; 10.1038 / jcbfm.2011.149 [doi].
  20. 20. Berg J, Hung YP, Yellen G (2009) Генетически кодируемый флуоресцентный репортер соотношения АТФ: АДФ.Нат Методы 6: 161–166.
  21. 21. Имамура Х., Нхат К.П., Тогава Х., Сайто К., Иино Р. и др. (2009) Визуализация уровней АТФ внутри отдельных живых клеток с помощью генетически кодируемых индикаторов на основе флуоресцентного резонансного переноса энергии. Proc Natl Acad Sci U S A 106: 15651–15656 04106 [pii]; 10.1073 / pnas.04106 [doi].
  22. 22. Чжао Ю., Цзинь Дж., Ху Кью, Чжоу Х.М., Йи Дж. И др. (2011) Генетически закодированные флуоресцентные сенсоры для определения внутриклеточного НАДН. Cell Metab 14: 555–566 S1550-4131 (11) 00350-0 [pii]; 10.1016 / j.cmet.2011.09.004 [doi].
  23. 23. Геренсер А.А., Нилсон А., Чой С.В., Эдман У., Ядава Н. и др. (2009) Количественная респирометрия на микропланшетах с поправкой на диффузию кислорода. Anal Chem 81: 6868–6878.
  24. 24. Херциг С., Рэйми Э., Монтессуит ​​С., Войти Дж. Л., Замбони Н. и др. (2012) Идентификация и функциональная экспрессия митохондриального переносчика пирувата. Science 337: 93–96 science.1218530 [pii]; 10.1126 / science.1218530 [doi].
  25. 25.Брикер Д.К., Тейлор Э.Б., Шелл Дж.С., Орсак Т., Бутрон А. и др. (2012) Митохондриальный переносчик пирувата, необходимый для поглощения пирувата дрожжами, дрозофилами и людьми. Science 337: 96–100 science.1218099 [pii]; 10.1126 / science.1218099 [doi].
  26. 26. Дивакаруни А.С., Wiley SE, Роджерс Г.В., Андреев А.Ю., Петросян С. и др. (2013) Тиазолидиндионы — острые специфические ингибиторы митохондриального переносчика пирувата. Proc Natl Acad Sci U S A 110: 5422–5427 1303360110 [pii]; 10.1073 / pnas.1303360110 [doi].
  27. 27. Ловатт Д., Зонневальд Ю., Ваагепетерсен Х.С., Шоусбо А., Хе В. и др. (2007) Транскриптом и сигнатура метаболического гена протоплазматических астроцитов в коре головного мозга взрослых мышей. J Neurosci 27: 12255–12266 27/45/12255 [pii]; 10.1523 / JNEUROSCI.3404-07.2007 [doi].
  28. 28. Пелкманс Л. (2012) Клеточная биология. Использование межклеточной изменчивости — новая эра в молекулярной биологии. Наука 336: 425–426 336/6080/425 [pii]; 10.1126 / science.1222161 [doi].
  29. 29. Геллерих Ф.Н., Гизатуллина З., Гайнутдинов Т., Мут К., Сеппет Э. и др. (2013) Контроль активизации митохондрий мозга цитозольным кальцием: митохондриальная педаль газа. IUBMB Life 65: 180–190 10.1002 / iub.1131 [doi].
  30. 30. Satrustegui J, Pardo B, del AA (2007) Митохондриальные переносчики как новые мишени для передачи сигналов внутриклеточного кальция. Physiol Rev 87: 29–67 87/1/29 [pii]; 10.1152 / Physrev.00005.2006 [doi].
  31. 31. Halestrap AP, Denton RM (1975) Специфичность и метаболические последствия ингибирования транспорта пирувата в изолированных митохондриях и препаратах интактных тканей альфа-циано-4-гидроксициннаматом и родственными соединениями.Biochem J 148: 97–106.
  32. 32. Панде С.В., Парвин Р. (1978) Транспорт пирувата и ацетоацетата в митохондриях. Переоценка. J Biol Chem 253: 1565–1573.
  33. 33. Paradies G, Capuano F, Palombini G, Galeotti T, Papa S (1983) Транспорт пирувата в митохондриях из различных опухолевых клеток. Cancer Res 43: 5068–5071.
  34. 34. Бреннан А.М., Коннор Дж. А., Шаттлворт К. В. (2006) Переходные процессы флуоресценции NAD (P) H после синаптической активности в срезах мозга: преобладающая роль митохондриальной функции.J Cereb Blood Flow Metab 26: 1389–1406.
  35. 35. Wyss MT, Jolivet R, Buck A, Magistretti PJ, Weber B (2011) Доказательства in vivo лактата как источника энергии нейронов. J Neurosci 31: 7477–7485 31/20/7477 [pii]; 10.1523 / JNEUROSCI.0415-11.2011 [doi].
  36. 36. Xu P, Qiu J, Gao C, Ma C (2008) Биотехнологические пути производства пирувата. J Biosci Bioeng 105: 169–175 S1389-1723 (08) 70048-3 [pii]; 10.1263 / jbb.105.169 [doi].

музыкантов из Остина получили $ 250 000 на Black Fret Ball 2019

Dr.Джо взрывным образом закрыл Black Fret Ball 2019 (Фото: Билл Такер)

Музыка — кровь Остина. Любой, кто говорит вам иное, не провел субботний вечер на Ред-Ривер и не обнаружил случайного исполнителя во время SXSW. В любой вечер в районе Большого Остина есть 100 шоу на выбор. Музыка — это часть того, кто мы есть.

Но вена начинает свертываться. Рост стоимости жизни, более высокая арендная плата за залы и десятки вариантов развлечений вынуждают артистов мирового уровня стагнировать.

Введите Black Fret , некоммерческую организацию, занимающуюся оказанием финансовой и практической поддержки музыкантам Остина. 7 декабря 2019 года во время ежегодного гала-концерта Black Fret Ball группа наградила 250000 долларов 19 местным артистам. Это был вечер сердца, общности и щедрости.

Что такое черный лад?

Соучредитель Black Fret Мэтт Отт с Ley Line на красной ковровой дорожке Black Fret Ball 2019 (Источник: Билл Такер)

Основанный друзьями и коллегами-меломанами Колином Кендриком и Мэттом Оттом, Black Fret является участником 501 (c) 3, посвященная поддержанию процветания музыки Остина за счет денежных грантов, справедливо оплачиваемых концертов и профессионального наставничества.

Участники платят годовой взнос и взамен получают доступ к десяткам интимных шоу в комнатах для прослушивания с участием одних из лучших местных талантов Остина. Средства направляются в фонд, который распределяется среди художников на основе голосов участников. На сегодняшний день Black Fret выделила более 1,5 миллиона долларов в виде грантов и прямых выплат местным организациям.

Но получатели не получают мешок с деньгами со знаком доллара. Денежные средства распределяются между обладателями грантов на этапах карьерного роста.Нужен туристический фургон? Black Fret сокращает чек. Студийное время для новой записи? Black Fret оплачивает все из назначенных долларов, которые были присуждены артисту.

Организация также предлагает программу наставничества. Выдающиеся профессионалы индустрии обучают артистов всему, от записи до промоушена и подготовки к гастролям. И все деньги возвращаются в музыкальную экосистему Остина, создавая устойчивую среду для процветания сцены.

Все в духе дарения

Black Fret Ball 2019 (Источник: Билл Такер)

Год музыкальных выступлений и голосования участников завершился на Black Fret Ball.Отчасти концерт, отчасти вечеринка и отчасти раздача подарков Опры Уинфри — театр Moody Theater превратился в эпицентр щедрости и поддержки Остина. Каждый артист, номинированный на участие в конкурсе, получил крупный (20 000 долларов США) или второстепенный грант (7 000 долларов США).

Обычно мелкие гранты составляют 5000 долларов. Но в этом году Black Pumas вернули свой основной грант Black Fret, позволив разделить средства между второстепенными победителями. Это увеличило сумму незначительного гранта до 7000 долларов. Это было удивительное проявление щедрости и заботы для музыкального сообщества Остина.

И победителями стали…

Основные получатели гранта: 20 000 долларов США

The Texas K.G.B. получил крупный грант на Black Fret Ball 2019 года (Фото: Билл Такер)
  1. Beat Root Revival
  2. Sydney Wright
  3. Superfónicos
  4. Dave Scher
  5. Ley Line
  6. Cari Hutson & Good Company
  7. The Watters
  8. Техасский КГБ
  9. Western Youth

Незначительные получатели гранта: 7000 долларов

Think No Think получили грант в размере 7000 долларов во время Black Fret Ball 2019 (Фото: Билл Такер)
  1. Tje Austin
  2. Go Fever
  3. Altamesa
  4. Cilantro Boombox
  5. Erika Веннерстрем
  6. А.Sinclair
  7. Good Field
  8. Джонатан Террелл
  9. Think No Think
  10. Dr. Joe

The Show, the Party, the Celebration

Beat Root Revival на Black Fret Ball 2019 (Источник: Билл Такер)

Концерт грандиозные пропорции были разбросаны среди дающей и хорошей вибрации. Впервые 17 из 20 номинантов выступили в рамках более чем четырехчасового мероприятия. Вечер начался с потрясающего выступления с двумя песнями гитариста / мультиинструменталиста Beat Root Revival.Управляющий бодран Андреа Маги соответствовал яростной игре на гитаре Бена Джонса, отчего Moody Theater погрузился в безумие танцев на стульях.

Среди других ярких моментов — захватывающий спектакль Эрики Веннерстром и театральное освещение (но трагически короткое по причине времени), поставленное фаворитом Остинота Superfónicos. Cilantro Boombox умолял толпу отложить телефоны в пользу живой жизни, а позже присоединился к Ley Line в трогательной дань уважения Дэниелу Джонстону.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.

2019 © Все права защищены. Карта сайта