Разное

Что лучше ваз 07 или 07: Стоит ли покупать ВАЗ 2107: обзор Жигулей

Какая машина лучше ВАЗ 2107 и 2104 или Самара?

Существует 6 классов автомобилей. Класс А — особо малый, В- малый, С — средний класс, к которому относится и автомобиль «Жигули», D- средний, Е- бизнес-класс, F-представительский класс. Машины класса С выбирают зачастую мужчины. У таких машин средние габариты и хороший дизайн. Автомобили такого типа не сильно отличаются по цене от транспорта класса В. При этом представители нашего автопрома стоят гораздо дешевле своих зарубежных конкурентов. Из недорогих автомобильных импортеров можно выделить Россию и Китай. Европейские малолитражные авто будут стоить на порядок выше, и в эксплуатации они обходятся дороже.

«Классика»

Дешевле вазовской классики вы ничего не найдете — это модель «Жигули» 2107 ,которые можно приобрести за 6800 долларов, и 2104, которая обойдется тысяче на две долларов дороже. Итоговая стоимость вашего автомобиля будет зависеть от его комплектации. У моделей 2107 и 2104 есть две комплектации, это два варианта двигателя, оформления салона.

Можно приобрести автомобиль также с газобаллонным оборудованием. В общем, машина очень проста в своей конструкции, ее можно починить своими силами, не прибегая к помощи механика, запчасти дешевле и доступнее по сравнению с иномарками. ВАЗ к маркам бензина неприхотлив, двигатель можно заправлять как 92, так и 80, только расход большой. Однако у моделей 2107 и 2104 много недоработок, скрипящие панели с пластиком, нередко встречаются некачественные детали. Зачастую клапана на таких машинах при низких оборотах начинают тарахтеть. Аварийные ситуации показали, что в этих автомобилях низкий уровень безопасности. Вместе с тем «Жигули» по проходимости на ступень выше других легковых автомобилей европейского класса.

ВАЗ «Самара»

ВАЗ «Самара» можно назвать переднеприводной преемницей «Жигулей» соответственно и стоить она будет дороже. По техническим характеристикам «Самара» превосходит своих предшественников классику. У этой модели с переднепреводной модели, двигатель находится перпендикулярно салону автомобиля, стоит реечное рулевое управление, подвеска «МакФерсон», противотуманные фары, электростеклоподъемники, центральный замок.

«Самара» сильно отличается от «классики» своим интерьером – сейчас ее комплектуют круглой панелью приборов с подсветкой, стеклоподъемниками кондиционером. Достоинства остаются прежними – простая конструкция автомобиля и маленькая цена на запчасти. Недостатки такие же — низкая безопасность, плохая подвеска, некачественный пластик. На рынке стоимость «Самара» может составлять 7800–8500 долларов.

Сейчас выбрать себе автомобиль можно в любой комплектации, только качество такой машины может оказаться невысоким. Впрочем эти два авто стоят денег, за которые их продают. Запчасти всегда в наличии. А что еще надо нетребовательному водителю?

Старые «Жигули» самые востребованные | АВТОСТАТ

На фоне резкого падения продаж новых автомобилей спрос на подержанные машины в России относительно стабилен и по-прежнему остается выше прошлогоднего. Самой продаваемой на вторичном рынке машиной стал снятый с производства ВАЗ-2107: с января по август было продано около 150 тыс. штук. В целом вторичный авторынок в России по своим объемам примерно в 2,5 раза больше первичного, что объясняется повышенной частотой сделок.

В августе в России было реализовано 517,8 тыс. подержанных автомобилей. Это всего на 1,4% меньше, чем в том же месяце 2013-го. Пока продажи новых машин бьют антирекорды, на вторичном рынке с начала года наблюдается уверенный рост. По данным агентства «Автостат», с января по август 2014-го в стране было продано 3,97 млн подержанных машин, что на 9,6% больше, чем год назад.

LADA вне конкуренции

Бесспорным лидером российского вторичного рынка, как, кстати, и первичного, остаются автомобили LADA. За восемь месяцев с ними было совершено 1,255 млн сделок (+3,9% по сравнению с прошлым годом). Среди 12 самых продаваемых поддержанных машин в России оказались 10 моделей LADA.

Неудивительно, что и в тройке самых востребованных оказались исключительно изделия ОАО «АвтоВАЗ». Первой по популярности стала снятая с конвейера в 2012 году модель ВАЗ-2107 («семерку» до сих пор собирают в Египте. – «Газета.Ru»). За восемь месяцев было продано 149,4 тыс. машин (+1,8%). Следом идет еще один «раритет» – ВАЗ-2114. Несмотря на то что эта модель представляет собой рестайлинг еще более древней вазовской «девятки», ВАЗ-2114 не выпускается с конца прошлого года, но остается достаточно популярной у россиян – 126,8 тыс. проданных с января по август автомобилей. Это сразу на 9,7% больше, чем годом ранее. На третьем месте ВАЗ-2110 – 116,7 тыс. машин (-3,5%). Три вышеуказанные модели сохраняли уверенное лидерство не только «в общем зачете», но и по итогам августа.

Кроме того, в топ-25 самых популярных моделей по итогам восьми месяцев попали едва ли не все представители «АвтоВАЗа», включая такие давно устаревшие машины, как ВАЗ-2106 (седьмое место, 81,6 тыс. ед.) и ВАЗ-2105 (16-е место, 45,7 тыс. ед.).

Иномарки отстают, но прибавляют

Среди иностранных брендов безоговорочным лидером по количеству проданных машин на вторичном рынке остается Toyota – 460 тыс. машин за восемь месяцев. Это почти в три раза меньше, чем у лидирующей LADA, но почти вдвое больше, чем у идущего третьим Nissan (203 тыс. машин). В пятерку самых востребованных также попали Chevrolet (155,6 тыс. машин) и Ford (146,8).

При этом стоит отметить, что темпы роста продаж подержанных иномарок, не только вошедших в топ-10, но и всех остальных, оказались заметно выше, чем у продукции «АвтоВАЗа». К примеру, подержанные Chevrolet, Kia, Mercedes и Skoda стали продаваться лучше на 20% и более.

Среди конкретных моделей иномарок самой популярной по итогам восьми месяцев стала Toyota Corolla – 92,8 тыс. проданных машин. В итоге японский автомобиль уступил лишь лидирующей тройке представителей «АвтоВАЗа».

Еще одна знаковая модель на вторичном рынке – Ford Focus. Причем популярность ее стремительно растет. Если в прошлом году по итогам августа было продано 76 тыс. машин, то в этом уже чуть больше 90 тыс.

Также значительно прибавили идущие следом в списке самых популярных иномарок Daewoo Nexia (54,8 тыс. автомобилей, +16,8%) и Renault Logan (48,8 тыс., +19,1%).

«Люди отказываются от новых машин в пользу подержанных»

«Рост вторичного рынка на фоне резкого падения продаж новых автомобилей объясняется несколькими факторами, – рассказал «Газете.Ru» аналитик «ВТБ Капитала» Владимир Беспалов. – Во-первых, часть потенциальных покупателей новых автомобилей вынуждены отказываться от своих планов и уходить на вторичный рынок, где цены значительно ниже и можно подобрать машину с приемлемыми характеристиками. Во-вторых, на фоне замедления рынка новых моделей многие компании, занимающиеся торговлей подержанными машинами, делают ставку именно на них и развивают этот сегмент. Но в целом вся эта тенденция с ростом продаж подержанных машин прослеживается уже достаточно давно».

По мнению аналитика, безоговорочное лидерство «АвтоВАЗа» вполне объяснимо. «Достаточно посмотреть на структуру российского автопарка, и мы увидим, что этих автомобилей просто очень много, – считает Беспалов. – Те же «пятерки» и «шестерки» продаются по очень низкой цене, поэтому они востребованы у тех, кому очень нужна хоть какая-то машина, может быть на короткий период. Стоит заметить, что «АвтоВАЗ» и на первичном рынке уверенно лидирует, так что здесь все закономерно», – считает Беспалов.

Эксперт отмечает, что некоторый спад на вторичном рынке может последовать, если будет продолжаться падение продаж новых машин. По словам Беспалова, огромный объем вторичного рынка объясняется повышенной частотой сделок на нем. «Новый автомобиль, как правило, продается далеко не сразу, а на вторичном рынке оборачиваемость значительно выше и одна и та же машина может в течение года не один раз сменить хозяев», – отметил эксперт.

«Газета.Ru»

ВАЗ 2107 — семерка. Современная классика | Инфо-Ваз

В 1980 году было принято решение о модификации отечественного автомобиля «пятерки». Ждать долго не пришлось – в 1982 году вышел совершенно новый автомобиль семейства «Жигули» Ваз 2107. Или попросту, как говорят в народе – «семерка». Этот автомобиль всегда производился на Волжском заводе. От «пятерки» его, безусловно, много что отличает – к примеру, решетка радиатора теперь не такая как раньше, она хромированная. Так же есть изменения в технических характеристиках и, конечно же, в самом салоне Ваз 2107. А вообще это «вечный» автомобиль, он был почти в каждом доме. И до сих пор его популярность достаточно высока. Кстати говоря, это последний автомобиль, который выпускается под маркой «заднеприводный», после него, начиная с Ваз 2108 только переднеприводные автомобили. Может быть, поэтому легендарная «семерочка» еще живет…

Технические характеристики

Итак, перед нами четырех дверный седан массой в 1030 кг., а максимальный вес 1430. В длину Ваз 2107 около 4126 мм., в ширину 1620 мм., а в высоту 1435. Двигатель, которым оснащают данную модель, является бензиновым (чуть позднее на место карбюратора пришел инжектор и до сих пор его выпускают именно с ним). Располагается он все также продольно, число клапанов 8. Мощность двигателя в Ваз 2107 достаточно высокая – 72 л.с. Скорость которую он может развить ровняется 155 км.ч. (более новые модели чуть по сильней и скорость соответственно больше). До 100 км. автомобиль может разогнаться за 15 секунд. Объем двигателя весьма различный – 1,3, 1,5, 1,6 и 1,7. Как уже подмечено ранее, привод распределен на задние колеса, а коробка передач, конечно же, механическая и четырехступенчатая.

Что касается марки топлива – лучше заливать 92 бензин, он в полном объеме отлично поддерживает все технические характеристики Ваз 2107. При езде по городу на 100 км. растрачивается около 10 литров, соответственно за городом меньше, около 8. Объем бака для топлива ровняется 39 литрам. Вот такие характеристики предлагают нам создатели этого автомобиля.

В салоне автомобиля в глаза бросаются высокие сиденья, которые оббиты специальной тканью, панель приборов стала еще более понятной, и появились дополнительные функции. В целом салон Ваз 2107 стал более современным и комфортным. В наши годы автомобиль выпускают с двигателем в 1,6 литров и в двух комплектациях – люкс и стандарт. Но особо эти две модификации друг от друга не отличаются.



Поделиться в соц. сетях:

Существует ли ВАЗ 2107 в новом кузове?

Вопрос о существовании планов концерна АвтоВАЗ по возвращению самого дешевого автомобиля на конвейер интересует многих автолюбителей нашей страны. Существует ли ВАЗ 2107 в новом кузове? Этот вопрос не оставляет равнодушными много пользователей сети Интернет. Потому мы решили пролить свет на эту тайну под семью печатями.

Разберемся, есть ли шанс увидеть 2107 снова на конвейере, и каковы шансы у россиян снова получить самый дешевый русский автомобиль, который сможет дать фору бюджетным китайцам?

Разработка ВАЗ 2107 в новом кузове существует

Корпорация АвтоВАЗ мастерски скрыла свою разработку, которая имело место несколько лет назад. Имя концептуального автомобиля – ВАЗ 2107М. Правда, визуально машина смотрится еще более неинтересно, чем оригинальная версия. Вероятно, именно поэтому 2107М так и не колесит по дорогам России.

Новый кузов для ВАЗ 2107 отличался следующими чертами:

  • приподнятая черная губа бампера сливается с решеткой радиатора;
  • фары стали не столь квадратными, уголки поднимаются вверх, словно удивляются;
  • нашлось место и для противотуманных фар, но смотрятся они не очень красиво;
  • были разработаны новые литые диски для нового дизайна 2107.

Но проект так и остался в стенах завода, не увидев мир. В том же году АвтоВАЗ полностью снял с производства свой самый дешевый автомобиль, начав создания совершенно новой модели, которая смогла бы завоевать весь бюджетный рынок России.

Замена для ВАЗ 2107 – Lada Granta

Оказывается, что теоретически ВАЗ 2107 в новом кузове – это Лада Гранта. Новая модель тольяттинского производства действительно удивила публику своим интересным дизайном, весьма качественной отделкой салона. Примечательно, что даже двери в этом русском автомобиле закрывались, словно у иномарки. Правда, счастье длится не так долго. Уже после 50 тысяч километров пробега Lada Granta начинает стремительно превращаться в ВАЗ 2107, активно требуя ремонтных работ.

Тем не менее, автомобиль уже успел полюбиться российским покупателям. Был создан специальный вариант для молодежи – Лада Гранта хэтчбек. Также существует невероятная версия с приставкой Спорт и очень мощным, как для Жигулей, двигателем. Но Granta – это уже далеко не ВАЗ 2107. Эти автомобили разделяет целая генерация:

  • абсолютно другой дизайн с разрывом в десятилетия;
  • иные двигатели, участие французского концерна Renault в создании новинки;
  • новые цены, которые значительно превысили стоимость «Семерки»;
  • другое восприятие автомобиля – более дорогой и высокий класс.

Так что дешевого бюджетного русского авто мы так и не дождались от замены ВАЗ 2107. Будем надеяться, что на Гранте АвтоВАЗ не закончит свои обновления и продолжит радовать россиян более дешевой техникой. Если быть совершенно откровенным и отбросить в сторону патриотичные убеждения, покупать Гранту за 10 тысяч долларов вовсе не интересно.

За те самые деньги можно приобрести Рено Логан, который в десятки раз надежнее. Потому российскому производителю нужно активно задумываться о своей ценовой политике и качестве выпускаемых автомобилей.

Будет ли когда-нибудь ВАЗ 2107 в новом кузове?

К сожалению, пока на этот вопрос стоит отвечать негативно. Российский автомобильный завод стал стремиться в новые перспективы, строить автомобили для европейского рынка, дабы достичь экспортных продаж. Но российский покупатель пока от такого стремления получает только дорогие и все еще не слишком качественные авто.

Скорее всего, ВАЗ 2107 в новом кузове никогда не появится. Для этого нужно потратить много времени и денег на разработку того, что может оказаться неуспешным. Предполагаем, что новая «Семерка» уже никогда не станет реальностью для русского автолюбителя. Но завод ведь должен прислушиваться к голосу народа.

Скажите, вы хотели бы увидеть ВАЗ 2107 в новом виде в фирменных салонах ВАЗ?

В России перечислили автомобили с самой высокой остаточной стоимостью в 2021 году

Renault Sandero
Фото Renault

Иван Бахарев, 16 февраля 2022, 14:58

Аналитическое агентство «АвтоСТАТ» составило рейтинг самых ликвидных автомобилей на российском рынке. В рамках исследования «Residual value — 2022» модели традиционно разделили по разным классам и двум ценовым сегментам – «массовому» и «премиальному».

Подсчитывая остаточную стоимость, аналитики изучили данные о 1100 модификациях 335 моделей 55 марок, официально представленных на российском рынке. За основу они брали цены на тот или иной автомобиль в 2018 году и сравнивали их со средней стоимостью его перепродажи в 2021-м, получая тем самым итоговый показатель остаточной стоимости модели в процентах.

Так, в популярном у россиян сегменте массовых компактных кроссоверов (SUV B) самой ликвидной оказалась корейская

Hyundai Creta. При перепродаже через три года она сохранила 112,7% своей первоначальной цены. То есть сейчас эту машину можно продать дороже, чем она стоила новой в 2018 году.

В категории недорогих легковушек B-класса лидерами стали Kia Rio, Renault Sandero и Citroen C3 Aircross, индексы остаточной стоимости которых составили 106,7%, 104,7% и 104,4% соответственно. Также в рейтинг попал отечественный LADA Largus, который с показателем 100,4% стал самым ликвидным легким коммерческим автомобилем (LCV) в России.

Рейтинг самых ликвидных моделей массового сегмента

В премиальном сегменте рынка самым ликвидным оказался немецкий кроссовер Porsche Cayenne с индексом 113,3%, который тоже можно продать дороже, чем он стоил три года назад. Чуть менее выгодным при перепродаже окажется внедорожник Mercedes-Benz G-Class («Гелендваген») с индексом 106,5%. Также в ТОП вошли Audi A5 Sportback (105,2%), Mercedes-Benz A-Class (101,9%), Volvo XC40 (101,5%), Lexus ES (100,9%) и Mercedes-Benz S-Class (81,4%).

Рейтинг самых ликвидных моделей премиального сегмента

Подводя итоги проведенного исследования, в «АвтоСТАТе» отметили, что остаточная стоимость многих попавших в рейтинг моделей превышает 100%. Очевидной причиной этого стал резкий рост цен на автомобили в прошлом году, однако само по себе попадание в рейтинг, по мнению аналитиков, нисколько не отменяет того факта, что именно данные модели лучше других сохраняют остаточную стоимость и несут практическую пользу для своих владельцев.

Спенсер Джонс и Хавьер Ваз из Вандербильта превзошли все шансы, как невероятные герои

Энрике Брэдфилд и Картер Янг подбадривающе кричали из бейсбольной площадки Вандербильта, когда недавний дублер Хавьер Ваз вошел в зону отбивающего.

Они сделали это снова, когда нападающий Спенсер Джонс столкнулся с тем же стрессом, что и выход в финал в выступлении Коммодоров в Мировой серии колледжей в среду вечером.

Брэдфилд, лучший первокурсник года по версии SEC, и Янг, лидер хоумрана команды, надеялись, что им выпадет шанс продлить сезон в Омахе, штат Небраска. Но поводов для оптимизма было немного.

Уже было два аута, и два отбивающих перед ними не были очевидным выбором для прорыва против Стэнфорда.

Ваз был наиболее известен тем, что выполнял сальто назад среди команды перед играми. И самым большим заголовком Джонса была операция Томми Джона, которая низвела его до назначенного нападающего.

Но Ваз ростом 5 футов 9 дюймов и Джонс ростом 6-7 лет оказались настолько большими, насколько это могли сделать игроки Вандербильта в этом сезоне. И были основания верить в невероятную пару героев девятого иннинга.

«Вы не дойдете до этого момента и не будете играть хорошо, если не будете присутствовать на протяжении всего сезона», — сказал тренер «Вандербильта» Тим Корбин.

ВНУТРИ ИГРЫ: После того, как Тим Корбин теряет хладнокровие, Вандербильт становится горячим на College World Series

ESTES: После великого побега Вандербильта против Стэнфорда, что еще вдруг может стать возможным?

СЛЕДУЮЩИЙ: 3 вещи, которые нужно знать о матче-реванше Вандербильта со штатом Северная Каролина в Мировой серии колледжей

Ваз был терпелив, сплотившись со счета 1-2, чтобы сыграть вничью. Джонс шлепнул наземный мяч по левой стороне и выбил его на приусадебный участок.

Это привело к тому, что сингл Брэдфилда забил Ваз и дикую подачу во время игры Янга на летучей мыши, чтобы забить Джонсу за невероятную победу со счетом 6: 5 над Кардиналом (39-17) и матч-реванш с NC State (37-18) в пятницу (13:00 CT, ESPN2) в полуфинале, нужно выиграть дважды.

Но в этой истории есть нечто большее, чем просто два удара летучих мышей от маловероятных прорывников игры.

Хавьер Ваз выбрал необычный путь к Вандербильту

Ваз — редкий случай, когда Вандербильт (47-16) перевелся в младший колледж, который обычно формирует свой элитный состав, подписывая перспективных выпускников старшей школы.

Выйдя из младшего колледжа LSU Eunice Junior, он был кандидатом на предсезонку в качестве быстрого накрывателя стола и кражи базы — вроде того, кем стал Брэдфилд.

Вместо этого Ваз служил запасным вторым игроком с низов и бегуном. Он начал только одну игру в регулярном сезоне, прежде чем был включен в стартовый состав на пять игр в турнире NCAA, включая все три в Омахе, чтобы обеспечить быстрый элемент в нижней части состава.

«В постсезонье мы чувствовали, что он собирается дать нам хорошие навыки в летучих мышах, — сказал Корбин.«Он собирался прогуляться. Он не собирался уходить из зоны. Он мог бить. Было много хороших вещей, которые, как мы чувствовали, он мог сделать, чтобы сместить атаку».

У Ваз было всего 29 ат-летучих мышей до розыгрыша критической прогулки в девятом иннинге.

«Но Джави очень вовлечен в каждую игру, и это была игра с первой по 50-ю», — сказал Корбин.

Спенсер Джонс, травмированный питчер, забил гол на диком поле

Джонс был более типичным игроком Вандербильта. Он прибыл в 2019 году как всеамериканец старшей школы и был одним из лучших двусторонних игроков в своем классе по набору персонала.

Но он получил перелом левого локтевого сустава, а затем вторая травма привела к операции Томми Джона летом 2020 года. нападающий.

У Джонса было только одно попадание в летучую мышь в Мировой серии колледжей, прежде чем он продлил сезон синглом в девятом.

«Он был готов ударить, и это самое главное», — сказал Корбин. «Его уход от игры был хорошим.Он был очень современен, и я благодарен ему за это».

У Вандербильта семь игроков вошли в число 250 лучших игроков предстоящего драфта Главной лиги бейсбола. Ваз и Джонс были одними из наименее известных игроков в списке, но у них были клатч-летучие мыши, несмотря на ограниченный опыт работы в центре внимания.

«Это потому, что они понимают командную роль», — сказал Корбин. «Понимание командной роли здесь, в Вандербильте, — это самое важное, что эти ребята могут сделать, прежде чем они получат игровую роль.

«Это должно случиться.Если ты не знаешь, что такое командная роль, ты никогда не выйдешь на поле».

Свяжитесь с Адамом Спарксом по адресу [email protected] и в Твиттере @AdamSparks.

Максимальная скорость, мощность, миль на галлон + все 2007-2009

Сводка спецификаций

бензиновый двигатель

1L встроенный 3

верхняя скорость

93 миль в час

93 миль в час

18,0 сек

Общая мощность

52 HP

пробег газа (комбинированный)

49 MPG

Droivestrain Layout

Front — FWD

Bookkg

1466 LBS

Посмотреть все Specs

★★★★★

★★★★★

4. 1

i

Рейтинг практичности2.9См. рейтинг

Данные о производительности

I

12 I

Power-To-Eye

28.2010 / HP78 HP / TONENE

Пробег газа

I

I

бензиновый двигатель

I

Емкость

1 Leber60.6 CU в

Выход

0,85 л.с. / CU в

Пиковый крутящий момент

58 фунтов · FT78 N · M

Клапаны / цилиндр

2 (6V Total)

впрыск топлива

Много точка

емкость топливного бака

7 .9 Gallons30 Liters

Развернуть (5 дополнительных)

Shardy Engine Specs

CORE X HIND

2.992 x 2.874 в

Коэффициент доли

1

1.04: 1OVER-Square

Цилиндр объем

20,2 CU в

FWD Droivestrain & Chassis

I

Трансмиссия (MT)

5 скоростей

Передняя подвеска

MacPherson Strut

Задняя подвеска

торсионные луча

Размеры и практичность

I

2007 Lada Seaz Ока ВАЗ-11116 Рейтинг

2007 Lada Seaz Ока ВАЗ-11116 Краткое описание характеристик и технических характеристик

Эта Лада Сеаз Ока ВАЗ-11116 выпускалась с 2007 по 2009 год. Это переднеприводный 3-дверный мини-хэтчбек с передним расположением двигателя и 4 местами. Безнаддувный 1-литровый бензиновый двигатель 6v Inline 3 мощностью 52 л.с. разгоняет этот Seaz Oka ВАЗ-11116 до 62 миль в час за 18,0 секунд и до максимальной скорости 93 миль в час. Имея снаряженную массу 1466 фунтов, он расходует в среднем 49,0 миль на галлон и может проехать 388 миль, прежде чем потребуется заправка топливного бака емкостью 7,9 галлона. Он поставляется с 5-ступенчатой ​​механической коробкой передач. Багажное отделение составляет 7,4 кубических фута, но может быть увеличено до 23 кубических футов для больших грузов с максимальной грузоподъемностью 750 фунтов.
Последнее обновление 20 ноября 2018 г.

РАННИЕ РАБОТЫ АНЫ ВАЗ: 2007-2016

2007 — 2016, 127 минут

Эта коллекция ранних фильмов бразильской художницы и режиссера Аны Ваз предлагает критическое осмысление отношений между колониализмом, современностью и надвигающейся экологической катастрофой. От Sacris Pulso (2007) до Amrika: Baha de las Flechas (2016) подборка прослеживает развитие ее отчетливо «воплощенного» кино. Делая акцент на материальности аналогового фильма, Ваз предлагает фильм как физический опыт, распространяя понятие телесного кино на собственное тело фильма.Ее тактильное кинопроизводство дестабилизирует и ставит под сомнение иерархический взгляд этнографического кино, подчеркивая нестабильность перспективы, а также присутствие перед и за камерой. В основе коллекции лежит цикл работ, исследующих колониальный и постколониальный обмен между Европой и Америкой. Он был начат с фильма «Идаде да Педра» (2013), который стирает несостоятельное различие между архитектурой и геологией в антропоцене, пересматривая историю Бразилии от ее колониального и модернистского этапов до спекулятивного будущего.

Коллекция включает

Америка: Baha de las Flechas  | 2016, 9мин.

Х Терра! (Земля есть!) | 2016, 13мин.

Восстановленный фильм, совместно с Тристаном Бера  | 2015, 20мин.

Запад | 2014, 15 мин.

Идаде да Педра (Каменный век)  | 2013 г., 29 мин.

Les Mains, Ngatives, совместно с Жюльеном Крезе  | 2012, 15мин.

Временные интервалы | 2012, 11мин.

Сакрис Пульсо | 2007, 15мин.


Ана Ваз (1986, Бразилия) — художница и режиссер, чьи фильмы, инсталляции и перформансы исследуют сложные отношения между средами, территориями и гибридными историями, раздвигая границы нашего восприятия. Ее фильмы демонстрировались на международном уровне на кинофестивалях и в таких учреждениях, как Tate Modern, Palais de Tokyo, Jeu de Paume, LUX Moving Images, New York Film Festival — Projections, TIFF Wavelengths, BFI, Cinma du Rel, TABAKALERA, Courtisane, Fondacin. Тапис и Галерея Уайтчепел.Недавние выставки включают «Путешествие за границу» в LUX Moving Images (Лондон), «Путешествие за границу: медиумы» в Centre d’Art Ange Leccia (Олетта, Корсика), «Эко-визионеры» в MAAT (Португалия), «Что такое облака?» в WKV Stuttgart и Videobrasil в SESC Pompia (Бразилия). Ана также является одним из основателей коллектива COYOTE вместе с Тристаном Бера, Нуно да Луш, Элидой Хог и Клеманс Сёра, междисциплинарной группы, работающей в области экологии, этнологии и политологии через множество сквозных платформ.В 2015 году она была удостоена премии Kazuko Trust Award, присуждаемой Обществом кино Линкольн-центра в знак признания художественного мастерства и инноваций в ее работе с движущимися изображениями.

Энди Ваз | Дискография | Дискогс

1 – 25 из 46

Показывать 2550100250500Обновить

Альбомы

CD 1-1 Энди Ваз Жить в Токио ‎(CD, Альбом, ООО) Вариант звука CD 1-1 Германия 2003 Продать эту версию
ВАЗБИТ-008 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> Жить в Детройте ‎(CD, Альбом, Микс) Постоянные битовые записи ВАЗБИТ-008 Италия 2005 Продать эту версию
ВАЗБИТ-009 Энди Ваз mr_toggler»> Повторяющиеся моменты длятся вечно… (Альбом) 2 версии Постоянные битовые записи ВАЗБИТ-009 Италия 2006 Продать эту версию 2 версии
[WPL01] Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> Когда мы играем вживую… ‎(Файл, MP3, 320) Модульная этикетка Netlabel [WPL01] Германия 2009
YRE-028cd Энди Ваз mr_toggler»> Прямой отпуск (Альбом) 3 версии Старые отчеты YRE-028cd Германия 2011 Продать эту версию 3 версии
YRE-033 Энди Ваз mr_toggler»> Празднование новоселья (Альбом) 3 версии Старые отчеты YRE-033 Германия 2015 Продать эту версию 3 версии

Синглы и EP

СВ 001 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> 1-1 ‎(12 дюймов) Вариант звука СВ 001 Германия 2001 Продать эту версию
СВ 002 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> 2-2 ‎(12 дюймов) Вариант звука СВ 002 Германия 2002 Продать эту версию
СВ 004 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> 4-4 ‎(12 дюймов) Вариант звука СВ 004 Германия 2002 Продать эту версию
СВ 006 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> 6-6 ‎(12 дюймов) Вариант звука СВ 006 Германия 2002 Продать эту версию
СВ 003 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> 3-3 ‎(12 дюймов) Вариант звука СВ 003 Германия 2002 Продать эту версию
СВ 005 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> Ремиксы звуковых вариаций ‎(2×12″) Вариант звука СВ 005 Германия 2003 Продать эту версию
ТЕЛ16 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> Уменьшающиеся города EP ‎(12″, EP) Телеграф ТЕЛ16 Франция 2004 Продать эту версию
СВ 007 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> 7-7 ‎(12 дюймов) Вариант звука СВ 007 Германия 2004 Продать эту версию
СВ 008 Энди Ваз mr_toggler»> 8-8 2 версии Вариант звука СВ 008 Германия 2005 Продать эту версию 2 версии
ВАЗБИТ-007 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> Люди внутри/снаружи ‎(12 дюймов) Постоянные битовые записи ВАЗБИТ-007 Германия 2005 Продать эту версию
Бит-01, бит-01 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> Курс первой помощи ‎(12 дюймов) Записи Persistencebit, Записи Persistencebit Бит-01, бит-01 Италия 2005 Продать эту версию
ВАЗБИТ-011 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> Ремиксы ‎(12 дюймов) Постоянные битовые записи ВАЗБИТ-011 Италия 2006 Продать эту версию
СВ 009 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> 9-9 ‎(12 дюймов) Вариант звука СВ 009 Германия 2006 Продать эту версию
ВАЗБИТ-010 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> Потерянные и восстановленные данные ‎(12 дюймов) Постоянные битовые записи ВАЗБИТ-010 Германия 2006 Продать эту версию
СВ 010 Энди Ваз mr_toggler»> Ремиксы звуковых вариаций 2 версии Вариант звука СВ 010 Германия 2007 Продать эту версию 2 версии
ТЕЛ31 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> Отсутствие летнего EP ‎(12″, EP, Промо, W/Lbl) Телеграф ТЕЛ31 Франция 2007 Продать эту версию
тел 31 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> EP «Защита от лунного разговора» ‎(12″, EP) Телеграф тел 31 Франция 2007 Продать эту версию
ВАЗБИТ-013 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> Концы и начало ‎(12 дюймов) Постоянные битовые записи ВАЗБИТ-013 Италия 2007 Продать эту версию
было-004 Энди Ваз credits a):not(.artist_in_title a)»> Гуманизация ‎(12″, EP) Старые отчеты было-004 Германия 2007 Продать эту версию

Границы | Внутреннее дисульфидное связывание и гликозилирование интерлейкина-7 защищают от протеолитической инактивации нейтрофильными металлопротеиназами и сериновыми протеазами

Введение

Интерлейкин (IL)-7 играет несколько непересекающихся ролей на протяжении нормального развития, гомеостаза и активации Т-клеток. В тимусе IL-7, продуцируемый эпителиальными клетками тимуса, обеспечивает выживаемость и пролиферацию развивающихся тимоцитов и регулирует время их дифференцировки (1–3). На периферии IL-7 является важным фактором выживания наивных Т-клеток и необходим для их гомеостатической пролиферации (4, 5). Память CD8 + Т-клеток также зависит от IL-7 для выживания (6). Эти эффекты IL-7 опосредованы несколькими нижестоящими факторами выживания, такими как Bcl-2 и Mcl-1 (7). В лимфатических узлах тонкий баланс между продукцией IL-7, в основном стромальными клетками, и его потреблением несколькими субпопуляциями врожденных лимфоидных клеток управляет пролиферацией Т-клеток, как было недавно продемонстрировано (8).

IL-7 передает сигналы через гетеродимерный рецептор, состоящий из цитокин-специфической α-субъединицы (CD127) и общей γ-цепи (γ c /CD132), которая является общей с другими цитокиновыми рецепторными комплексами семейства IL-2 (9 ). Связывание IL-7 приводит к образованию сигнально-компетентного рецепторного комплекса, перекрестному фосфорилированию Jak1 и Jak3, связанных с IL-7Rα и γ c -цепью, соответственно, и фосфорилированию IL-7Rα, который затем действует в качестве сигнальной платформы для Stat5 и других сигнальных молекул (9, 10). В Т-клетках CD8 + эктодомен IL-7Rα сбрасывается с клеточной поверхности при взаимодействии с IL-7, достигая самых низких уровней через 24–48 ч после стимуляции (11).

Регуляторные Т-клетки человека (Treg) не экспрессируют IL-7Rα (12). Способность IL-7 стимулировать пролиферацию наивных Т-клеток и Т-клеток памяти, но не Treg, резко контрастирует с эффектами IL-2 (13–15). У пациентов с идиопатической CD4-лимфопенией инъекции рекомбинантного человеческого IL-7 способствовали вспышкам пролиферации CD4 + и CD8 + Т-клеток.Увеличение количества Т-клеток CD4 + и CD8 + также наблюдалось в исследовании с участием пациентов с хронической инфекцией ВИЧ-1, где применение ИЛ-7 увеличивало пролиферацию как периферических Т-клеток, так и тимоцитов, о чем свидетельствует увеличение у недавних эмигрантов тимуса (16, 17). Нарушения в сигнальном пути IL-7/IL-7R/JAK/STAT также связаны с лейкемией, с особенно неблагоприятным прогнозом у взрослых пациентов с Т-ОЛЛ (18–20). Поэтому исследования поведения, биодоступности и функциональных эффектов ИЛ-7 актуальны в биологии и медицине.

Недавно мы показали, что IL-2, другой цитокин семейства γ c , эффективно расщепляется нейтрофильными протеазами как в биохимических, так и в клеточных анализах (21). В то время как нейтрофильная эластаза (NE), протеиназа 3 (P3) и катепсин G (catG) полностью разрушали IL-2, матриксная металлопротеиназа (MMP)-9 продуцировала семейство стабильных продуктов, которые сохраняли способность связываться с рецептором IL-2 и инициировать передачу сигналов, хотя время и величина явно отличаются от таковых для интактного цитокина.Исследование расщепления других цитокинов семейства γ c с помощью MMP-9 выявило, что IL-7 и IL-21 являются мишенями, в то время как IL-4, IL-9 и IL-15 практически не расщепляются или не расщепляются (21). Эти результаты добавили больше мишеней к растущему репертуару хемокинов и цитокинов, процессируемых MMP-9. Отчеты из нашей и других лабораторий ясно показали, что расщепление, опосредованное MMP-9, регулирует биологическую активность таких молекул. MMP-9 сильно потенцирует IL-1β и IL-8, тогда как расщепление IL-2 и хемокина CCL2 снижает их эффективность в анализах клеток-мишеней (22, 23).Следовательно, активность MMP-9, которая, как известно, значительно повышается в местах острого воспаления из-за дегрануляции нейтрофилов и других типов клеток (24, 25), может влиять на клеточные ответы на растворимые сигнальные факторы. Кроме того, MMP-9 расщепляет эктодомены нескольких критически важных молекул клеточной поверхности, таких как α-субъединица рецептора IL-2 CD25 (26).

В настоящем исследовании мы исследовали протеолитический процессинг IL-7 нейтрофильными протеазами.В частности, мы идентифицировали новые сайты расщепления в последовательности IL-7 для протеаз MMP-9, NE и P3. Кроме того, мы показали, что посттрансляционные модификации, особенно внутренние дисульфидные связи и гликозилирование, защищают IL-7 от протеолиза нейтрофильными протеазами и от функциональной инактивации, и что последний протеолиз видоспецифичен.

Материалы и методы

Белки, реагенты и буферы

Были получены следующие препараты рекомбинантного человеческого IL-7; человеческий IL-7, полученный в E. coli (Peprotech, кат. № 200-07), человеческий IL-7, продуцируемый в клетках насекомых (Novus, кат. № NBP2-52629), и человеческий IL-7, продуцируемый в клетках HEK-293 человека (Biolegend, кат. № 581904) (см. Дополнительную таблицу 1). Эктодомен рецептора IL-7 был приобретен у R&D Systems (rhIL-7, каталожный номер 306-IR-050). Рекомбинантную ММР-9 человека получали, очищали, активировали и тестировали, как описано (27). Рекомбинантные человеческие proMMP-2, proMMP-7, proMMP-8 и «дезинтегрин и металлопротеазы» (ADAM)17 были приобретены у R&D Systems и активированы, как описано ранее (28).Активный NE человека был приобретен у Abcam (номер по каталогу ab).

Протеолитический процессинг IL-7 и His-Tag Pull-Down 150 мМ NaCl, 10 мМ CaCl

2 , 30 мМ Трис и 0,01% Твин-20 (рН 7,4). Реакции инкубировали при 37°С в течение 4 часов, если не указано иное. Вытягивание гистидиновой метки проводили с использованием магнитных микрогранул Ni-NTA в соответствии с инструкциями производителя (ThermoFisher, кат. нет. 88832).

SDS-PAGE, вестерн-блоттинг и секвенирование по Эдману

Образцы IL-7 разделяли в 16% трициновых гелях Novex (Invitrogen, кат. номер EC6695BOX) в соответствии с рекомендациями поставщика. Белки в гелях окрашивали с помощью набора SilverQuest Silver Staining Kit (Invitrogen, кат. № LC6070) или переносили на мембраны PVDF с использованием системы Trans-Blot Turbo Transfer System с соответствующими материалами и протоколами (Biorad, кат. № 1704150). Для секвенирования по Эдману белки на мембране PVDF окрашивали Кумасси бриллиантовым синим (Coomassie R-250, Thermo Scientific, кат.нет. 20278) и анализировали с помощью секвенатора белка Procise 491cLC (Applied Biosystems) или секвенатора белка PPSQ-51A (Shimadzu). Для анализа сигнальных молекул белки в клеточных лизатах разделяли в 4-12% трис-глициновых гелях в восстанавливающих условиях и переносили на мембраны из ПВДФ. Мембраны блокировали в течение 1 ч в 5% BSA с буфером TBST (150 мМ NaCl, 0,1 % Tween 20, 50 мМ Трис, pH 7,5) и инкубировали в течение ночи с анти-pSTAT3 (Tyr 705 ) (Cell Signaling, кат. № 9138) или анти-β-актин (Proteintech, кат.нет. 20536-1-АР) антитела. После промывки блот инкубировали с конъюгированными с пероксидазой антимышиными IgG или антикроличьими IgG в течение 1 ч при комнатной температуре. Наконец, изображения вестерн-блоттинга были разработаны с использованием системы Vilber Lourmat Fusion (Labtech International) и субстрата для вестерн-блоттинга Pierce ECL (Thermo Fisher Scientific).

Анализы связывания

Эксперименты по поверхностному плазмонному резонансу (SPR) проводились на приборе Biacore T200 (GE Healthcare). Рекомбинантные субъединицы рецептора IL-7 были иммобилизованы на поверхности чипов из карбоксиметилированного декстрана (CM5, GE Healthcare).Эксперименты проводили при 25°C в 10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 3 мМ ЭДТА и 0,05% Tween 20. Несколько концентраций интактного IL-7 или cIL-7 (IL-7, расщепленный MMP-9) вводили в течение 2 мин при скорости потока 30 мкл/мин, после чего поддерживалась 5-минутная фаза диссоциации. Поверхность сенсорного чипа регенерировали с помощью 4 М MgCl 2 . Аффинность связывания (K D ) и кинетические константы скорости (k на и k на ) были получены после подгонки экспериментальных данных к модели реакции с двумя состояниями (IL-7-IL-7Rα) в Biacore T200. Программное обеспечение для оценки 2.0 и согласно McElroy et al. (29).

Эксперименты по культивированию клеток и пролиферации

Клетки HPB-ALL (клеточная линия Т-клеточного лейкоза человека) были приобретены в коллекции немецких клеточных культур (DSMZ, № по каталогу ACC 483). Клетки поддерживали в среде RPMI-1640 с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS). Для стимуляции к клеткам добавляли указанные количества интактного рекомбинантного человеческого IL-7 или cIL-7 и контролировали рост клеток с использованием системы анализа живых клеток Incucyte и соответствующего программного обеспечения (Essen BioScience).Для проточного цитометрического анализа IL-7R 0,5×10 6 клеток HPB-ALL стимулировали 50 нг/мл IL-7 или оставляли без обработки в течение указанного периода времени.

Проточная цитометрия

Клетки промывали ледяным PBS и инкубировали в течение 15 минут с блокирующими Fc-рецептор антителами анти-CD16/анти-CD32 (BD Biosciences Pharmingen). После промывания PBS + 2% FCS клетки окрашивали в течение 20 мин. Клетки HPB-ALL окрашивали анти-CD127/IL7Rα, конъюгированным с фикоэритрином (PE) (Biolegend, кат.нет. № 351342), а мононуклеарные клетки периферической крови человека (РВМС) окрашивали конъюгированным с фикоэритрином (ФЭ) анти-CD8 (Biolegend, кат. 351315) и краситель жизнеспособности Zombie Aqua™ (BioLegend). Клетки дважды промывали, фиксировали 0,37% формальдегидом и анализировали на BD LSR Fortessa X20 с программным обеспечением DIVA (BD Biosciences, v9.0). Результаты были дополнительно проанализированы с помощью программного пакета FlowJo (BD Biosciences, v10.0).Пример стратегии гейтирования показан на дополнительном рисунке 4.

Изоляция и стимуляция РВМС человека

РВМС были выделены из однодневных лейкоцитарных пленок, полученных из крови, сданной здоровыми добровольцами (Центр переливания крови Бельгийского Красного Креста, Мехелен, Бельгия) с применением Lymphoprep (Axis-Shield). Клетки суспендировали в среде RPMI-1640 с добавлением 10% FCS, 1 мМ пирувата натрия и 1% GlutaMAX при плотности 10 6 клеток/мл и стимулировали 500 пМ рекомбинантного человеческого IL-7 или cIL-7.Клетки далее анализировали с помощью проточной цитометрии.

Дегрануляты нейтрофилов человека и инкубация

Дегрануляты нейтрофилов собирали из гранулоцитов крови человека, стимулированных N-формилметиониллейцилфенилаланином (fMLF), как описано ранее (21, 28). Все доноры крови дали письменное информированное согласие в соответствии с Хельсинкской декларацией. Дегрануляты нейтрофилов от разных доноров объединяли, чтобы свести к минимуму индивидуальные различия. Для оценки переваривания IL-7 нейтрофильными протеазами 1 мкг IL-7 инкубировали с 5 мкл нейтрофильного дегранулята (37°C, 6 часов) в присутствии или в отсутствие ингибитора металлопротеазы (100 мМ ЭДТА), ингибитора сериновой протеазы. (1 мг/мл Пефаблок), ингибитор аспарагиновой протеазы (0.7 мкг/мл пепстатина) или ингибитор цистеинпротеазы (10 мкг/мл Е-64).

Результаты

ММП-9 эффективно расщепляет человеческий ИЛ-7, и на этот протеолиз влияет состояние гликозилирования ИЛ-7 -7 в качестве субстрата MMP-9 (21). Учитывая важность IL-7 в пролиферации Т-клеток, мы стремились к дальнейшей характеристике этого взаимодействия. Поскольку известно, что гликозилирование влияет на взаимодействие между IL-7 и IL-7Rα (29), мы провели наши эксперименты с негликозилированным IL-7 (производится в

г.coli ), с гликозилированным IL-7, продуцируемым в клетках насекомых, и с гликозилированным IL-7 человека, продуцируемым в клетках HEK-293 человека (дополнительная таблица 1). Инкубация IL-7 с активной MMP-9 человека привела к образованию по крайней мере двух заметных фрагментов IL-7 (IL-7* и IL-7**, рисунки 1A, B и дополнительный рисунок 1). Негликозилированный ИЛ-7 наиболее эффективно расщеплялся с полным расщеплением уже через 1 час после инкубации при молярном соотношении 1:100 (ММП-9/ИЛ-7). Напротив, гликозилированный IL-7 расщеплялся менее эффективно, что требовало более высоких соотношений фермент:субстрат (рис. 1A) и более длительных периодов инкубации (рис. 1B) для полного переваривания.Анализ N-концевой последовательности привел к идентификации нео-N-концевого фрагмента LGEAQ, репрезентативного для расщепления между аминокислотными остатками Ala 128 и Leu 129 (рис. 1C, D). Этот сайт расщепления был также подтвержден in silico расщеплением IL-7 с помощью MMP-9 с использованием пакета iProt-Sub (30), и он присутствовал в открытой петле между α-спиралями C и D (29, 31) ( Рисунок 1E).

Рисунок 1 Характеристика расщепления IL-7 MMP-9. (A) Рекомбинантный IL-7, полученный в клетках E. coli (слева), клетках насекомых (в центре) или клетках HEK-293 человека (справа), инкубировали с различными концентрациями активной ММР-9 при указанных молярных соотношениях ( ММП-9/ИЛ-7), в течение 2 часов. Фрагменты разделяли с помощью SDS-PAGE в восстанавливающих условиях с последующим окрашиванием серебром. ММР-9, интактный IL-7 (IL-7 i ) и два продукта расщепления (IL-7* и IL-7**) обозначены стрелками, соответственно, черного и зеленого цвета. дюйм ; отрицательный контроль в присутствии 500 мкМ ингибитора ММП SB-3CT (inh). (B) Рекомбинантный IL-7, полученный в клетках E. coli (вверху, негликозилированные), клетках насекомых (в центре, частично гликозилированные) или клетках человека HEK-293 (внизу, полностью гликозилированные), инкубировали с активной ММП- 9 в молярном соотношении 1:100 (ММП-9/ИЛ-7), и образцы отбирали в указанные моменты времени. Фрагменты разделяли с помощью SDS-PAGE в восстанавливающих условиях. Интактный IL-7 (IL-7 i ) и два продукта расщепления (IL-7* и IL-7**) обозначены стрелками соответственно черного и зеленого цвета. дюйм ; отрицательный контроль в присутствии 500 мкМ ингибитора ММП SB-3CT. (C) , данные секвенирования по Эдману. Идентификация нео-N-концов, образующихся при расщеплении IL-7 с помощью MMP-9 (1:100, MMP-9:IL-7 в течение 6 часов). Идентификация N-конца LGEAQ фрагмента IL-7** указывает на сайт расщепления MMP-9 между аминокислотными остатками A 128 и L 129 . Вариации N-концевых аминокислот фрагментов IL-7* обусловлены различными системами экспрессии IL-7 (дополнительная таблица 1). (D) Аминокислотная последовательность человеческого IL-7 с указанием сайтов гликозилирования (синие), дисульфидных мостиков (желтые), сайта расщепления MMP-9 (зеленый треугольник) и фрагментов IL-7 (зеленые стрелки). (E) 3D-модель IL-7 [структура PDB 3DI3 (29)] с указанием местоположения сайта расщепления ММР-9 (зеленый треугольник), сайтов гликозилирования (синие шестиугольники) и дисульфидных мостиков (желтый).

Фрагменты IL-7, полученные в результате протеолиза MMP-9, остаются связанными через дисульфидные мостики и остаются функционально активными

Поскольку IL-7 способен образовывать три внутренних дисульфидных мостика (рис. при расщеплении MMP-9 фрагменты IL-7 оставались бы связанными или функционировали бы как отдельные белковые фрагменты. IL-7 с меткой His (на С-конце) расщепляли ММР-9, и С-концевой фрагмент удаляли с помощью осаждения никелевыми шариками (Фигура 2А). Даже при расщеплении ММР-9 N-концевой фрагмент IL-7 осаждался вместе с С-концевым фрагментом, указывая на то, что фрагменты остаются присоединенными в нативных условиях. Кроме того, в денатурирующих, но не восстанавливающих условиях (электрофорез с SDS и без восстанавливающего агента) фрагменты также оставались вместе, что указывает на сильное взаимодействие, основанное на образовании дисульфидного мостика (рис. 2B).Эти результаты были подтверждены для гликозилированных вариантов, продуцируемых клетками насекомых и млекопитающих (см. Дополнительную фигуру 2). Затем мы задались вопросом, повлияет ли расщепление MMP-9 на функцию IL-7. IL-7 связывается с гетеродимерным комплексом, состоящим из IL-7Rα и общей γ-цепи [совместной с рецепторами других интерлейкинов (9)], и индуцирует выживание и пролиферацию тимоцитов (29, 32). Чтобы имитировать взаимодействие между IL-7 и IL-7Rα, мы иммобилизовали эктодомен IL-7Rα на чипах SPR и проанализировали связывание IL-7 и cIL-7 (рис. 2C, D).Интересно, что модификация IL-7 путем протеолиза MMP-9 не снижала его способности связываться с цепью IL-7Rα. Константы диссоциации интактного IL-7 по сравнению с расщепленным IL-7 (cIL-7) всегда были одного порядка для агликозила (, т.е. без гликозилирования) E. coli -производного (7,7 x 10 — 8 по сравнению с 6,4 x 10 -8 ) и гликопротеины клеток млекопитающих (3,1 x 10 -7 по сравнению с 2,9 x 10 -7 ).Следовательно, связывание с цепью IL-7Rα всегда было одинаковым для интактного и расщепленного IL-7. Также можно было сравнить влияние гликозилирования на сродство к цепи IL-7Rα. Мы обнаружили, что присутствие N-связанных олигосахаридов снижало сродство IL-7Rα к белку IL-7, и эти эффекты наблюдались как для интактных, так и для расщепленных гликоформ IL-7. (Рисунок 2D и дополнительный рисунок 3). Связываясь с IL-7Rα, IL-7 индуцирует быструю клатрин-опосредованную интернализацию комплекса IL-7/IL7R, которая необходима для активации нижестоящей передачи сигнала (33). Для исследования этого механизма мы использовали клеточную линию Т-клеточного лейкоза человека HPB-ALL. Добавление IL-7 в питательную среду приводило к быстрому снижению уровня IL-7Rα на поверхности клетки (дополнительные рисунки 4 и 5A), вызывало опосредованную IL-7 передачу сигнала (дополнительная фигура 5B) и стимулировало рост HPB- ВСЕ клетки в бессывороточных условиях (дополнительная фигура 5C). Интересно, что расщепление IL-7 с помощью MMP-9 не изменяет способность IL-7 индуцировать интернализацию рецептора (рис. 3A), активировать pSTAT3 (рис. 3B и дополнительная фигура 6) или индуцировать пролиферацию HPB-ALL (рис. 3C). ).Наконец, как IL-7, так и cIL-7 могли снижать уровни IL-7R на поверхности CD8 + РВМС человека с одинаковой эффективностью через 24 часа после обработки IL-7 (рис. 3D). Известно, что через 24 часа после стимуляции IL-7 CD8 + PBMC также индуцируют выделение IL-7R, известный поздний функциональный эффект IL-7 (11).

Рисунок 2 Взаимодействие IL-7 с рецептором IL-7 остается неизменным после расщепления MMP-9. (A) IL-7, меченный His (продуцируемый в клетках насекомых), подвергали вытягиванию гистидиновой метки.Белки, связанные с гранулами, и несвязанные белки были разделены путем восстановления SDS-PAGE. (B) IL-7 в присутствии (+) или в отсутствие (-) MMP-9, подвергнутый невосстанавливающему или восстанавливающему электрофоретическому разделению. (C) 3D-модель взаимодействия между IL-7 и IL-7Rα (синий) [на основе структуры PDB 3DI3 (29)] с указанием фрагментов IL-7, генерируемых MMP-9 [IL-7* (оранжевый) и Ил-7** (красный)]. (D) Связывание IL-7 [из E. coli (вверху) или клеток млекопитающих (внизу)] и IL-7, расщепленного MMP-9 (cIL-7, молярное соотношение 1/100 MMP-9/ IL-7, 4 часа при 37 ° C) в rhIL-7Rα, как было проанализировано с помощью SPR (репрезентативные результаты для 2 экспериментов, см. Дополнительную фигуру 3).Цвета представляют различные концентрации IL-7, как указано, а черные линии представляют собой кривые, соответствующие модели реакции с двумя состояниями (IL-7-IL-7Rα) в соответствии с McElroy et al. (29).

Рисунок 3 Функциональные эффекты интернализации IL-7 и рецептора IL-7 в клетках HPB-ALL и человеческих CD8 + PBMC остаются интактными после расщепления MMP-9. (A) Анализ IL-7R клеточной поверхности, через 5 минут после стимуляции клеток HPB-ALL 50 нг/мл IL-7, cIL-7 (молярное соотношение 1/100 ММП-9/ИЛ-7, 4 часа при 37°C) или эквивалент MMP-9.Данные представляют собой четыре независимых эксперимента, при этом экспериментальные повторы показаны одним цветом. Гистограммы представляют средние значения, а планки погрешностей представляют IQR. Данные были нормализованы к нестимулированным условиям, представляющим стационарные количества IL-7R клеточной поверхности (100% IL-7Rα). *p < 0,05, как определено с помощью критерия Крускала-Уоллиса с поправкой Данна на множественные сравнения и рассчитано по средним значениям каждого эксперимента. (B) Анализ pSTAT3 (Tyr 705 ) в клетках HPB-ALL, через 15 минут после стимуляции 50 нг/мл IL-7, cIL-7 (молярное соотношение 1/100 ММП-9/ИЛ-7, 4 часа при 37°С) или эквивалент ММР-9. Каждая точка данных указывает на независимый эксперимент. Гистограммы представляют средние значения, а планки погрешностей представляют IQR. Данные нормализованы к β-актину. (C) Рост клеток HBP-ALL, 4 дня после стимуляции 50 нг/мл IL-7, cIL-7 (1/100 молярное соотношение MMP-9/IL-7, 4 ч при 37°C) или эквивалент MMP-9 (правая панель). Данные представляют собой шесть независимых экспериментов, все повторы которых показаны одним цветом. Гистограммы представляют собой медианы, а планки погрешностей представляют IQR. Данные нормализовали для клеток, стимулированных только IL-7, что соответствует 100% росту.***p ≤ 0,001, определяемый по критерию Крускала-Уоллиса с поправкой Данна на множественные сравнения и рассчитанный по средним значениям каждого эксперимента. (Левая панель) репрезентативные изображения клеток HPB-ALL с указанными стимуляциями. Масштабная линейка = 200 мкм. (D) Анализ IL-7R на клеточной поверхности через 24 ч после стимуляции CD8 человека + РВМС с 15 нг/мл IL-7, cIL-7 (молярное соотношение 1/100 ММП-9/ИЛ-7, 4 часа при 37°С) или эквивалент ММР-9. Гистограммы представляют средние значения, а планки погрешностей представляют IQR.*p < 0,05 по критерию Крускала-Уоллиса с поправкой Данна на множественные сравнения. нс, не имеет значения.

Человеческий IL-7 эффективно расщепляется другими нейтрофильными металлопротеиназами и сериновыми протеазами вместе с другими металлопротеиназами (

, например, MMP-8, ADAM-17) и сериновыми протеиназами ( e.грамм. NE, catG и P3) (34, 35). Анализ In silico показал, что несколько других протеаз, удерживаемых нейтрофильными гранулами (34), потенциально могут расщеплять IL-7 (рис. 4A, B). Мы провели in vitro экспериментов по расщеплению с набором металлопротеиназ и сериновых протеаз, характерных для нейтрофилов. Все протестированные металлопротеиназы были способны расщеплять IL-7 с образованием фрагментов, сходных с MMP-9 (IL-7* MMP и IL-7** MMP , фигура 4C). Расщепление MMP-8 и ADAM17 было менее эффективным, чем MMP-9, тогда как расщепление MMP-2 (известное своим высоким сходством с MMP-9) было подобно расщеплению MMP-9. Сериновые протеазы catG, P3 и NE также были способны расщеплять IL-7 (рис. 4D). Протеолиз IL-7 под действием catG был наименее эффективным, однако протеолиз под действием P3 и NE приводил к образованию одного или нескольких более мелких фрагментов (IL-7*** SP ). NE генерировал два фрагмента, сходных с MMP-9, но с меньшей молекулярной массой (IL-7** SP ). N-концевое секвенирование IL-7 ** SP и IL-7 *** SP привело к идентификации нео-N-концевого фрагмента ALGEAQ, репрезентативного для расщепления между аминокислотными остатками Ala 127 и Ala 128 (рис. 4E), отличающиеся только одной аминокислотой от сайта расщепления MMP-9.Этот сайт расщепления не был предсказан in silico .

Рисунок 4 Передача сигналов IL-7 через рецептор IL-7 остается интактной после расщепления нейтрофильными протеазами. (A) In silico предсказание протеолиза IL-7 нейтрофильными протеазами (инструмент iProt-Sub). Разделение протеаз на основе их места в гранулах нейтрофилов, включая желатиназу (зеленый), специфические (оранжевый) и азурофильные гранулы (синий). (B) Трехмерная модель IL-7 [структура PDB 3DI3 (29)] с указанием местоположения предполагаемых сайтов расщепления нейтрофильными протеазами. (C) Расщепление IL-7 подбором металлопротеиназ. Переваривание при молярном соотношении 1/100 (ММП/ИЛ-7) и в течение 4 часов. Ил-7 и , неповрежденный Ил-7; фрагменты отмечены звездочками (*). (D) Расщепление IL-7 сериновыми протеазами catG, P3 и NE. Переваривание при молярном соотношении 1/100 (протеаза/ИЛ-7) и в течение 4ч. (E) Данные секвенирования по Эдману. Идентификация нео-N-концов, образующихся при расщеплении IL-7 NE или P3 (1:100, протеаза:IL-7 в течение 4 часов).Идентификация N-конца ALGEAQ фрагмента IL-7** SP указывает на общий сайт расщепления между аминокислотными остатками A 127 и A 128 . (F) Анализ IL-7R на клеточной поверхности, через 5 минут после стимуляции клеток HPB-ALL 50 нг/мл IL-7, cIL-7 (молярное соотношение 1/100 ММП-9/ИЛ-7, 4 часа при 37°С) или эквивалент указанной протеазы. Данные представляют собой три независимых эксперимента, все повторы которых показаны одним цветом. Гистограммы представляют средние значения, а планки погрешностей представляют IQR.Данные были нормализованы к нестимулированным условиям, представляющим стационарные количества IL-7R клеточной поверхности (100% IL-7Rα). Статистический анализ выполнен по критерию Крускала-Уоллиса с поправкой Данна на множественные сравнения и рассчитан по средним значениям каждого эксперимента. (G) Анализ pSTAT3 (Tyr 705 ) в клетках HPB-ALL, через 15 минут после стимуляции 50 нг/мл IL-7, cIL-7 (1/100 молярного соотношения протеаза/IL-7, 4 часа при 37°С). Каждая точка данных указывает на независимый эксперимент.Гистограммы представляют средние значения, а планки погрешностей представляют IQR. Данные нормализованы к β-актину. (H) Рост клеток HBP-ALL, 4 дня после стимуляции 50 нг/мл IL-7, cIL-7 (молярное соотношение протеаза/IL-7 1/100, 4 часа при 37°C) или эквивалентом ММП-9. Данные представляют собой четыре независимых эксперимента, все повторы которых показаны одним цветом. Гистограммы представляют собой медианы, а планки погрешностей представляют IQR. Данные нормализовали для клеток, стимулированных только IL-7, что соответствует 100% росту.Статистический анализ выполнен по критерию Крускала-Уоллиса с поправкой Данна на множественные сравнения и рассчитан по средним значениям каждого эксперимента. нс, не имеет значения.

Протеолиз IL-7 под действием нейтрофильных протеаз не изменяет опосредованную IL-7 пролиферацию в клеточной линии Т-клеточного лейкоза

этот протеолиз на функциональности IL-7. Интересно, что расщепление IL-7 с помощью NE или P3 не изменяет интернализации IL-7R (рис. 4F).Хотя для НЭ наблюдалось снижение передачи сигналов pSTAT3 (рис. 4G и дополнительная фигура 7), этот эффект не был значительным и не приводил к значительному влиянию на пролиферацию Т-клеточной линии HPB-ALL (рис. 4H). Далее исследовали совместное действие протеаз нейтрофилов ММП-9, НЭ и Р3. Обработка IL-7 этим коктейлем протеаз приводила к исчезновению интактного IL-7 при восстановлении SDS-PAGE (Фигура 5A). Интересно, что в невосстанавливающих условиях снова появлялся сигнал IL-7 с более высокой молекулярной массой, за исключением одной формы с более низкой молекулярной массой, генерируемой сериновыми протеазами.Кроме того, инкубация дегранулятов нейтрофилов доноров-человеков с ИЛ-7 приводила к исчезновению интактного ИЛ-7 и появлению фрагментов ИЛ-7, сходных с ИЛ-7* ММП , ИЛ-7* SP , ИЛ-7 ** MMP и IL-7** SP (рис. 5B). Только ингибитор сериновых протеаз Пефаблок был способен ингибировать образование фрагментов ИЛ-7, что указывает на то, что сериновые протеазы нейтрофилов являются основными протеазами, расщепляющими ИЛ-7 в дегранулятах нейтрофилов. Кроме того, в невосстанавливающих условиях потеря сигнала интактного IL-7 восстанавливалась, что снова указывает на тот факт, что фрагменты IL-7 остаются взаимосвязанными после протеолиза (Фигура 5C).Наконец, мы также исследовали, останется ли IL-7 функционально неповрежденным. Действительно, IL-7, обработанный коктейлем протеаз нейтрофилов или нейтрофильными дегранулятами, оставался способным индуцировать фосфорилирование STAT3 (рис. 5D).

Рисунок 5 Совместное расщепление IL-7 нейтрофильными протеазами приводит к образованию фрагментов, которые остаются взаимосвязанными и функционально неповрежденными. (A) Обработка ИЛ-7 коктейлем нейтрофильных протеаз (ММП-9, Р3 и NE в молярном соотношении 1/100 (протеаза/ИЛ-7) в течение 4 часов) в присутствии или в отсутствие ингибитор сериновой протеазы (S), ингибитор металлопротеиназы (M) или их комбинации (SM).Анализ белков путем восстановления SDS-PAGE иллюстрирует исчезновение интактного IL-7 и диффузное окрашивание при более низких молекулярных массах. Напротив, в невосстанавливающих условиях большая часть сигнала IL-7 появляется снова. (B) Расщепление IL-7 протеазами, присутствующими в дегранулятах нейтрофилов (5 мкл из пула 5–10 доноров и инкубация с 1 мкг IL-7) в присутствии или в отсутствие ингибитора сериновых протеаз (S), металлопротеиназы ингибитор (М), ингибитор протеазы аспарагиновой кислоты (А), ингибитор цистеиновой протеазы (С) или их комбинации.Верхняя панель, денситометрический анализ интактного IL-7 (IL-7 i ). Данные нормированы на интактный IL-7 в условиях без дегрануляции нейтрофилов. **p ≤ 0,01, ***p ≤ 0,001 по критерию Краскела-Уоллиса с поправкой Данна на множественные сравнения (n = 3). Нижняя панель, репрезентативное изображение анализа SDS-PAGE. (C) IL-7, расщепленный дегранулятом нейтрофилов (ND) и работающий в невосстанавливающих условиях, приводит к повторному появлению IL-7 с более высокой молекулярной массой. (D) Индукция pSTAT3 IL-7 при обработке коктейлем (C) нейтрофильных протеаз (MMP-9, P3 и NE в молярном соотношении 1/100 (MMP/IL-7) и для 4h) в присутствии или в отсутствие ингибитора сериновой протеазы (S), ингибитора металлопротеиназы (M) или их комбинаций (SM) или с нейтрофильной дегрануляцией (ND). β-актин показан как контроль нагрузки.

Мышиный IL-7 не содержит чувствительной к протеазе области петли

Затем мы хотели дополнительно исследовать протеолиз IL-7 in vivo [ e.грамм. у мышей с нокаутом MMP-9 (KO). Учитывая различия в функционировании системы IL-7/IL-7R между людьми (развитие Т-клеток) и мышами (развитие Т-клеток и В-клеток) (32), мы оценили, восприимчив ли мышиный IL-7 к протеолизу путем ММП-9. Мышиный IL-7 не расщеплялся MMP-9 (Фигура 6A). Интересно, что множественное выравнивание аминокислотных последовательностей IL-7 нескольких видов показало, что в мышином и крысином IL-7 отсутствует чувствительная к протеазе петлевая область (фиг. 6B). Это открытие указывает на разницу в чувствительности к протеазе между мышиным и человеческим IL-7.

Рисунок 6 Мышиный IL-7 не имеет чувствительной к протеазе области петли и не расщепляется ММР-9. (A) Инкубация рекомбинантного человеческого (hu, полученного из клеток насекомых) и (mo, E. coli, полученного из ) IL-7 с активной MMP-9 и анализ продуктов реакции путем восстановления SDS-PAGE. (B) Выравнивание аминокислотной последовательности IL-7 человека, бонобо, свиньи, крупного рогатого скота, овцы, кролика, крысы, мыши и курицы с указанием MMP-9 (зеленый треугольник) и сериновой протеазы (белый треугольник) сайты расщепления человеческого IL-7.Множественное выравнивание последовательностей выполняли с помощью ClustalO, при этом относительная консервативность аминокислотной последовательности была указана различными оттенками синего, а консервативные остатки цистеина — желтым. Обратите внимание на отсутствующие последовательности в мышином и крысином IL-7 и на другую последовательность в курином IL-7 в области, представляющей чувствительную к протеазе петлю.

Обсуждение

Интерлейкин-7 является важным регуляторным фактором роста и выживания Т-клеток при аутоиммунитете и раке (9, 10, 32). Хотя производство и сигнальный каскад ИЛ-7 и его рецепторов хорошо изучены (9, 32), имеется ограниченная информация о его элиминации или периоде полувыведения. Мы установили, что в пределах семейства лигандов γ c /CD132 человека (9) IL-2, IL-7 и IL-21 эффективно расщепляются MMP-9, тогда как IL-4, IL-9 и IL-15 нет (21). Кроме того, IL-2 теряет сигнальные функции после протеолиза MMP-9 и комбинированной протеазной активности, присутствующей в дегранулятах нейтрофилов, но для других лигандов это еще неизвестно (21). Здесь мы задокументировали (i) биохимические детали обработки IL-7 ферментами нейтрофилов; (ii) биологические эффекты протеолиза на сродство связывания IL-7 с его альфа-цепью рецептора, на опосредованные рецептором сигнальные функции и на рост линии Т-клеток в качестве биологического показателя активности IL-7.Путем сравнения интактного и расщепленного IL-7 и различных гликоформ IL-7 мы смогли установить, что (iii) N-связанные олигосахариды защищают от протеолиза и что (iv) функция дисульфидных мостиков между цистеинами заключается в сохранении молекулы. в сигнальной конформации после протеолиза у человека, тогда как (v) у других видов, включая мышей и крыс, биология этих взаимодействий может быть совершенно иной.

Сначала мы определили, что область петли между α-спиралями C и D наиболее чувствительна к протеолизу.В частности, эффективный сайт расщепления MMP-9 был идентифицирован между аминокислотными остатками Ala 128 и Leu 129 . При молярном соотношении ММП-9/ИЛ-7 1:100 почти полное расщепление ИЛ-7 было достигнуто в течение двух часов, что указывает на то, что такое расщепление in vitro было высокоэффективным по сравнению с другими известными субстратами ММП-9, такие как желатины, актин и тубулин (36, 37). Кроме того, мы идентифицировали близлежащий сайт расщепления в IL-7 для NE и P3, расположенный между Ala 127 и Ala 128 , точно на одну аминокислоту N-концевее сайта расщепления MMP-9 в доступной внешней петле.Интересно, что мы также показали, что чувствительная к протеазе петлевая область IL-7 отсутствует в мышином и крысином IL-7. Это открытие особенно интересно, учитывая известные иммунологические различия между мышами и мужчинами (38). В контексте нашего исследования наиболее интересные различия связаны с количеством нейтрофилов и системой IL-7/IL-7R. Количество нейтрофилов в крови человека превышает их количество в крови мышей (, см. ниже ). Что касается системы IL-7/IL-7R, то у людей эта система в основном контролирует развитие Т-клеток, а у мышей развитие как Т-клеток, так и В-клеток (32).

Расщепление различных гликоформ IL-7 с помощью MMP-9 привело к образованию двух стабильных фрагментов, различимых при восстановлении SDS-PAGE. Мы тестировали три различные рекомбинантные формы: агликозил IL-7 из E coli , IL-7 с гликанами клеток насекомых и IL-7 с совокупностью гликоформ, продуцируемых в клеточной линии млекопитающих. В соответствии с такими различиями в гликозилировании интактный IL-7, а также расщепленные фрагменты мигрировали с разной молекулярной массой и по-разному окрашивались с использованием кумасси бриллиантового синего после электрофоретического разделения в восстанавливающих условиях. Кроме того, в невосстанавливающих условиях эти фрагменты оставались связанными благодаря наличию внутренних дисульфидных мостиков, удерживая фрагменты IL-7 взаимосвязанными. Как следствие, общая структура оставалась интактной, и IL-7, расщепленный MMP-9, оставался способным индуцировать интернализацию IL-7R, активировать передачу сигнала через pSTAT3 и индуцировать пролиферацию клеток в клеточной линии Т-клеточного лейкоза человека HPB-ALL. Кроме того, в первичных CD8 + PBMC человека стимуляция интактным IL-7 или IL-7, расщепленным MMP-9, приводила к аналогичному снижению IL-7R на клеточной поверхности.

Мы показали, что это явление не ограничивается MMP-9, и что стабильные фрагменты были также обнаружены после расщепления IL-7 другими MMP (MMP-2 и MMP-8), ADAM17, NE и P3, и что также при В этих условиях расщепленный IL-7 оставался способным индуцировать опосредованную IL-7R клеточную пролиферацию. Интересно порассуждать, какова функция этой модификации Ил-7. Одним из возможных объяснений является изменение периода полураспада IL-7 при определенных обстоятельствах, таких как измененное окислительно-восстановительное состояние клеточной среды или компартмента. Например, расщепленный IL-7 может терять структурную целостность в восстанавливающих средах, что приводит к образованию отдельных фрагментов и изменению функциональности IL-7. Такой внутриклеточный процессинг может существенно влиять на рециркуляцию интактного IL-7 по сравнению с расщепленным IL-7. Кроме того, восстановление внеклеточной модификации сульфгидрильных групп цистеина (, например, путем окисления H 2 O 2, нитрозилирования или сульфгидрирования) может привести к образованию фрагментов IL-7 с измененной функцией.Всесторонние последующие исследования, охватывающие эти гипотезы, и дальнейшие сравнения в системах клеточных культур с клеточными линиями и специфическими первичными клетками, включая популяции Т-клеток, дадут дополнительную информацию и могут иметь отношение как к клиническому нацеливанию, так и к парентеральному использованию рекомбинантных цитокинов, включая IL- 7.

Гликозилирование белков, как O-, так и N-связанными олигосахаридами, представляет собой посттрансляционные модификации, обладающие способностью защищать от протеолиза (39, 40). Первоначально описанная для активности N-связанных сахаров панкреатической рибонуклеазы в богатой протеазами среде в кишечнике (40), эта функция была распространена на многие молекулы во внутренней среде и даже на внутриклеточные гликопротеины.Олигосахариды также совместно определяют специфическую активность ферментов и сигнальных молекул. Эта функция была также описана для гликозилированных цитокинов около 25 лет назад (41). Хотя период полужизни сигнальных молекул, особенно тех, которые поступают в кровоток, определяется гликозилированием, этому аспекту цитокинов до сих пор уделялось мало внимания. Интересно, что было показано, что гликозилирование эктодомена IL-7Rα модулирует взаимодействие IL-7, причем связывание с гликозилированным IL-7Rα происходит в 300 раз сильнее, чем с негликозилированным IL-7Rα (29).Как это ни парадоксально, в другом исследовании было показано, что гликозилирование IL-7 не влияет на его связывание или активацию IL-7Rα (42). Здесь мы показываем, что гликозилирование IL-7 снижает эффективность протеолиза с помощью MMP-9. Помимо регуляции функций IL-7 уровнями экспрессии, гликозилирование как посттрансляционная модификация добавляет дополнительный способ регуляции системы IL-7/IL-7R и ее функций. Исследования гликозилирования терапевтически используемых цитокинов постепенно привлекают внимание.Например, установлено, что протеолиз интерферона-β (ИФН-β) под действием ММП-9 затруднен гликозилированием (43) и что, возможно, вследствие этого у больных рассеянным склерозом (РС), получавших гликозилированный ИФН, образуется меньше нейтрализующих антител. -β (44). В соответствии с этим и данными настоящего исследования статус гликозилирования IL-7 требует пристального внимания, безусловно, когда IL-7 будет использоваться в терапевтических целях.

В недавнем полногеномном ассоциативном исследовании (45) генетические изменения в α-цепях рецепторов IL-2 и IL-7 (46, 47) были связаны с повышенным риском РС.Следовательно, эта информация наводит на мысль о ключевом вкладе этих сигнальных путей в развитие и/или прогрессирование РС. Кроме того, на основании паттернов экспрессии в очагах поражения, сыворотке и спинномозговой жидкости пациентов с РС была установлена ​​важность протеаз, таких как ММП, НЭ, тканевые калликреины и катепсины, при РС (48). Точно так же передача сигналов, опосредованная IL-7, способствует развитию лейкемии (32, 49), а раковые клетки обычно имеют повышенную продукцию протеаз, таких как MMP-9 и другие MMP (50).Следовательно, модуляция IL-7 протеазами, секретируемыми инфильтрирующими лейкоцитами или раковыми клетками, является вероятным процессом как при РС, так и при раковых патологиях, и эти элементы оправдывают дальнейшее изучение функциональных последствий протеолитического процессинга IL-7. Интересно, что было идентифицировано не так много естественных мутаций в гене IL7 . Описан естественный человеческий вариант IL-7, в котором отсутствует С-концевая часть белка IL-7 (введение центрального стоп-кодона R69X), а соответствующий гомозиготный генотип приводит к заболеванию, называемому бородавчатой ​​эпидермодисплазией-5 (EV5, Интернет-менделевское наследование человека / OMIM 618309) (51).

Одним из ограничений нашего исследования является доказательство MMP- и SP-генерированных фрагментов in vivo . Однако отсутствие чувствительных и специфических методов обнаружения для дифференциального количественного определения фрагментов цитокинов и хемокинов in vivo является хорошо известной проблемой. Например, с широко используемыми технологиями ELISA невозможно различить интактные и расщепленные цитокины, а вестерн-блоттинг менее чувствителен и дает только полуколичественный анализ. Помимо этого аспекта, с имеющейся информацией о структурных различиях между мышиным и человеческим IL-7, обычное использование доклинических моделей мышиных животных в иммунологических исследованиях сопряжено с некоторыми ловушками как на клеточном, так и на молекулярном уровне.На уровне воспалительных клеток, в частности нейтрофилов, являющихся основным типом клеток в настоящем исследовании, существуют значительные различия между мышами и людьми. В физиологии человека и при большинстве патологий нейтрофилы составляют большинство (50-70%) циркулирующих лейкоцитов и, таким образом, являются первыми и наиболее многочисленными участниками острых инфекций и воспалений (52). У видов мышей число нейтрофилов затмевается числом лимфоцитов, что вызывает критическое отношение к этим различиям в трансляционных исследованиях.На уровне взаимодействующих молекул мы предоставляем здесь исходную информацию о различиях между видами с целью беспристрастной интерпретации данных in vivo и сохранения критического значения при переводе фенотипов от одного вида к другому.

Наша работа также может быть помещена в контекст недавних клинических применений блокады сигнала IL-7 для лечения лейкемии, лимфомы и аутоиммунных заболеваний. Недавно было обнаружено, что эндогенный ИЛ-7 увеличивает экспрессию онкогенной киназы (PIM1) в клетках с альфа-цепью ИЛ-7 (IL-7Rα/CD127).Это наблюдалось как при Т-ОЛЛ, так и при Т-клеточной острой лимфобластной лимфоме (Т-ЛБЛ) (53). Во-вторых, важность секреции ИЛ-7 первичными клетками Т-ОЛЛ человека как аутокринного стимула положительной обратной связи была доказана только недавно, и это открытие побуждает к дальнейшим исследованиям, чтобы интерферировать на интерфейсах ИЛ-7/ИЛ-7Р (54). Последний подход достигает зрелости в превосходных новых исследованиях, в которых ксенотрансплантированные клетки T-ALL человека, полученные от пациентов, уничтожаются химерным моноклональным антителом против человеческого IL-7Rα/CD127 in vivo посредством антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (55). .Наши результаты также имеют значение для исследований аутоиммунных заболеваний, в которых протеазно-цитокиновые взаимодействия играют несколько ролей (56). В недавнем исследовании очаговой алопеции, аутоиммунного заболевания волосяных фолликулов, опосредованного Т-клетками, было обнаружено, что блокада IL-7 подавляет острые воспалительные реакции заболевания, в то же время относительно щадя Treg (57).

В заключение мы показываем, что человеческий IL-7 эффективно обрабатывается ферментами нейтрофилов в чувствительной к протеазе петле, образуя протеоформы с дисульфидной связью, сохраняющие связывание с рецептором и сигнальные функции.Человеческий IL-7 представляет собой гликозилированный цитокин, и присоединенные к нему гликаны защищают его от протеолиза нейтрофильными протеазами. Посттрансляционные модификации, включая протеолиз и гликозилирование, заслуживают большего внимания в фундаментальных и прикладных исследованиях цитокинов. Наконец, мы показываем, что мышиный IL-7 не содержит чувствительной к протеазе петли и, следовательно, не расщепляется ММП-9. Этим открытием мы еще больше подкрепляем известные различия в биологии IL-7 между людьми и мышами.

Заявление о доступности данных

Наборы данных, представленные в этом исследовании, можно найти в онлайн-репозиториях.Названия репозитория/репозиториев и инвентарные номера можно найти в статье/дополнительных материалах.

Вклад авторов

Дизайн исследования: GO, JV, VR, RVSP и EU-B. Проведенные эксперименты и проанализированные данные: все авторы. Написал рукопись: GO, JV и VR, при участии всех авторов. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Это исследование было поддержано Исследовательским фондом Flanders/FWO-Vlaanderen (G0A3820N), финансированием C1 KU Leuven (C16/17/010), Бельгийским фондом Charcot (JV и GO) и Rega Foundation ( ВР, СП). ММ поддерживается исследовательской стипендией «Для женщин в науке» L’Oréal-UNESCO-FWO. Конфликта интересов нет. JV является постдокторантом Исследовательского фонда Фландрии (FWO Vlaanderen, мандат 12Z0920N).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Авторы выражают благодарность Leen Vandermosten, Mieke Gouwy, Mieke De Buck, Noëmie Pörtner, Lotte Vanbrabant и Maaike Cockx за помощь в подготовке клеток.Мы благодарим Пьера Фитена и Эрика Мартенса за их помощь в производстве рекомбинантной MMP-9 человека.

Дополнительный материал

Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2021.701739/full#supplementary-material

Ссылки

1. Boudil A , Матей И.Р., Ши Х., Богданоски Г. , Юань Дж.С., Чанг С.Г. и др. IL-7 координирует пролиферацию, дифференцировку и рекомбинацию Tcra во время бета-селекции тимоцитов. Nat Immunol (2015) 16:397–405. doi: 10.1038/ni.3122

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

2. Шитара С., Хара Т., Лян Б., Вагацума К., Зуклис С., Холландер Г.А. и др. ИЛ-7, продуцируемый эпителиальными клетками тимуса, играет основную роль в развитии тимоцитов и интраэпителиальных лимфоцитов TCR Gammadelta+. J Immunol (2013) 190:6173–9. doi: 10.4049/jimmunol.1202573

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

3.фон Фриден-Джеффри У., Виейра П., Люциан Л.А., Макнейл Т., Бурдах С.Е., Мюррей С. и др. Лимфопения у мышей с удаленным геном интерлейкина (IL)-7 идентифицирует IL-7 как неизбыточный цитокин. J Exp Med (1995) 181:1519–26. doi: 10.1084/jem.181.4.1519

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

5. Tan JT, Dudl E, LeRoy E, Murray R, Sprent J, Weinberg KI, et al. IL-7 имеет решающее значение для гомеостатической пролиферации и выживания наивных Т-клеток. Proc Natl Acad Sci USA (2001) 98:8732–7.doi: 10.1073/pnas.161126098

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

8. Мартин К.Э., Спасова Д.С., Фримпонг-Боатенг К., Ким Х., Ли М., Ким К.С. и соавт. Доступность интерлейкина-7 поддерживается гемопоэтическим стоком цитокинов, состоящим из врожденных лимфоидных клеток и Т-клеток. Иммунитет (2017) 47:171–182 e174. doi: 10.1016/j.immuni.2017.07.005

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

11. Вранькович А., Кроули А.М., Джи К., Кумар А., Ангел Дж. Б.ИЛ-7 снижает экспрессию альфа-рецептора ИЛ-7 (CD127) и индуцирует выделение CD127 человеческими CD8+ Т-клетками. Int Immunol (2007) 19:1329–39. doi: 10.1093/intimm/dxm102

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

12. Liu W, Putnam AL, Xu-Yu Z, Szot GL, Lee MR, Zhu S, et al. Экспрессия CD127 обратно коррелирует с FoxP3 и супрессорной функцией человеческих CD4+ T Reg клеток. J Exp Med (2006) 203:1701–11. doi: 10.1084/jem.20060772

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

13.Перна С.К., Пальяра Д., Махендравада А., Лю Х., Бреннер М.К., Савольдо Б. и др. Интерлейкин-7 опосредует селективную экспансию опухоленаправленных цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) без усиления регуляторного ингибирования Т-клеток. Clin Cancer Res (2014) 20:131–9. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-13-1016

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

14. Розенберг С.А., Спортес С., Ахмадзаде М., Фрай Т.Дж., Нго Л.Т., Шварц С.Л. и др. Введение ИЛ-7 людям приводит к увеличению числа клеток CD8+ и CD4+, но к относительному снижению количества Т-регуляторных клеток CD4+. J Immunother (2006) 29:313–9. doi: 10.1097/01.cji.0000210386.55951.c2

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

15. Sportes C, Hakim FT, Memon SA, Zhang H, Chua KS, Brown MR, et al. Введение rhIL-7 людям увеличивает разнообразие репертуара TCR in vivo за счет предпочтительной экспансии субпопуляций наивных Т-клеток. J Exp Med (2008) 205:1701–14. doi: 10.1084/jem.20071681

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

16.Леви И., Лакабарац С., Вайс Л., Виар Дж., Гужар С., Лельевр Ж.Д. и др. Улучшенное восстановление Т-клеток у взрослых, инфицированных ВИЧ-1, при лечении ИЛ-7. J Clin Invest (2009) 119:997–1007. doi: 10.1172/JCI38052

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

17. Леви Ю., Серети И., Тамбусси Г., Рути Дж. П., Лельевр Дж. Д., Дельфрэсси Дж. Ф. и др. Влияние рекомбинантного интерлейкина 7 человека на восстановление Т-клеток и продукцию тимуса у ВИЧ-инфицированных пациентов, получающих антиретровирусную терапию: результаты рандомизированного, плацебо-контролируемого, многоцентрового исследования фазы I/IIa. Clin Infect Dis (2012) 55:291–300. doi: 10.1093/cid/cis383

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

18. Vicente C, Schwab C, Broux M, Geerdens E, Degryse S, Demeyer S, et al. Целевое секвенирование выявляет ассоциации между мутациями IL7R-JAK и эпигенетическими модуляторами при остром Т-клеточном лимфобластном лейкозе. Haematologica (2015) 100:1301–10. doi: 10.3324/гематол.2015.130179

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

19.Liu Y, Easton J, Shao Y, Maciaszek J, Wang Z, Wilkinson MR, et al. Геномный ландшафт острого лимфобластного лейкоза Т-линии у детей и молодых взрослых. Нат Жене (2017) 49:1211–8. doi: 10.1038/ng.3909

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

20. Vanden Bempt M, Demeyer S, Broux M, De Bie J, Bornschein S, Mentens N, et al. Совместная активация энхансера с помощью TLX1 и STAT5 способствует развитию NUP214-ABL1/TLX1-позитивной Т-клеточной острой лимфобластной лейкемии. Раковая клетка (2018) 34:271–85.e277. doi: 10.1016/j.ccell.2018.07.007

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

21. Рыбакин В., Стас М., Угарте-Берзал Э., Ноппен С., Вандорен Дж., Ван Алст И. и др. Желатиназа B/матриксная металлопротеиназа-9 и другие протеазы нейтрофилов выключают активность интерлейкина-2. Biochem J (2019) 476:2191–208. doi: 10.1042/BCJ20180382

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

22.Шенбек У., Мах Ф., Либби П. Генерация биологически активного ИЛ-1 бета матриксными металлопротеиназами: новый независимый от каспазы-1 путь процессинга ИЛ-1 бета. J Immunol (1998) 161:3340–6.

Реферат PubMed | Google Scholar

23. Van den Steen PE, Proost P, Wuyts A, Van Damme J, Opdenakker G. Нейтрофильная желатиназа B десятикратно усиливает интерлейкин-8 путем аминотерминального процессинга, в то время как она разрушает CTAP-III, PF-4 и GRO- Альфа и оставляет RANTES и MCP-2 нетронутыми. Кровь (2000) 96:2673–81. doi: 10.1182/blood.V96.8.2673

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

24. Masure S, Proost P, Van Damme J, Opdenakker G. Очистка и идентификация нейтрофильной желатиназы 91 кДа. Высвобождение активирующим пептидом интерлейкином-8. Eur J Biochem (1991) 198:391–8. doi: 10.1111/j.1432-1033.1991.tb16027.x

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

25. Арди В.С., Куприянова Т.А., Дерюгина Е.И., Куигли Дж.П.Нейтрофилы человека уникальным образом высвобождают не содержащую ТИМП ММП-9, обеспечивая мощный каталитический стимулятор ангиогенеза. Proc Natl Acad Sci USA (2007) 104:20262–7. doi: 10.1073/pnas.0706438104

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

26. Sheu BC, Hsu SM, Ho HN, Lien BC, Huang BC, Lin BC, et al. Новая роль металлопротеиназы в иммуносупрессии, опосредованной раком. Cancer Res (2001) 61:237–42.

Реферат PubMed | Академия Google

27.Van den Steen PE, Van Aelst I, Hvidberg V, Piccard H, Fiten P, Jacobsen C, et al. Гемопексин и O-гликозилированные домены регулируют биодоступность желатиназы B/MMP-9 посредством ингибирования и связывания с грузовыми рецепторами. J Biol Chem (2006) 281:18626–37. doi: 10.1074/jbc.M512308200

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

28. Nuti E, Rossello A, Cuffaro D, Camodeca C, Van Bael J, van der Maat D, et al. Бивалентный ингибитор с селективностью в отношении тримерной MMP-9 усиливает хемотаксис нейтрофилов и позволяет проводить функциональные исследования протеоформ MMP-9. Ячейки (2020) 9:1634. doi: 10.3390/cells34

Полный текст CrossRef | Google Scholar

30. Song J, Wang Y, Li F, Akutsu T, Rawlings ND, Webb GI, et al. iProt-Sub: комплексный пакет для точного картирования и прогнозирования специфических для протеаз субстратов и сайтов расщепления. Бриф Биоинформ (2019) 20:638–58. doi: 10.1093/bib/bby028

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

31. Kroemer RT, Kroncke R, Gerdes J, Richards WG.Сравнение 3D-моделей четырех различных изоформ человеческого IL-7 с человеческим и мышиным IL-7. Protein Eng (1998) 11:31–40. doi: 10.1093/protein/11.1.31

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

33. Энрикес С.М., Рино Дж., Ниббс Р.Дж., Грэм Дж.Дж., Барата Дж.Т. ИЛ-7 индуцирует быструю интернализацию, опосредованную клатрином, и JAK3-зависимую деградацию ИЛ-7Rальфа в Т-клетках. Кровь (2010) 115:3269–77. doi: 10.1182/blood-2009-10-246876

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

34.Рорвиг С., Остергаард О., Хегаард Н.Х., Боррегаард Н. Протеомное профилирование подмножеств гранул нейтрофилов человека, секреторных везикул и клеточной мембраны: корреляция с транскриптомным профилированием предшественников нейтрофилов. J Leukoc Biol (2013) 94:711–21. doi: 10.1189/jlb.1212619

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

35. Adrover JM, Aroca-Crevillén A, Crainiciuc G, Ostos F, Rojas-Vega Y, Rubio-Ponce A, et al. Запрограммированное «разоружение» протеома нейтрофилов снижает масштабы воспаления. Nat Immunol (2020) 21:135–44. doi: 10.1038/s41590-019-0571-2

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

36. Cauwe B, Martens E, Van den Steen PE, Proost P, Van Aelst I, Blockmans D, et al. Белок-1/CAP1, ассоциированный с аденилатциклазой, как биологический субстрат-мишень для желатиназы B/MMP-9. Exp Cell Res (2008) 314:2739–49. doi: 10.1016/j.yexcr.2008.07.008

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

37.Van den Steen PE, Proost P, Brand DD, Kang AH, Van Damme J, Opdenakker F, et al. Генерация гликозилированных остаточных эпитопов из человеческого коллагена типа II с помощью желатиназы B. Biochemistry (2004) 43:10809–16. doi: 10.1021/bi0493665

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

39. Гот К.К., Вахрушев С.Ю., Джоши Х.Дж., Клаузен Х., Шьолдагер К.Т. Тонкая настройка ограниченного протеолиза: основная роль регулируемого сайт-специфического O-гликозилирования. Trends Biochem Sci (2018) 43:269–84.doi: 10.1016/j.tibs.2018.02.005

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

40. Rudd PM, Joao HC, Coghill E, Fiten P, Saunders MR, Opdenakker G, et al. Гликоформы изменяют динамическую стабильность и функциональную активность фермента. Биохимия (1994) 33:17–22. doi: 10.1021/bi00167a003

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

42. Goodwin RG, Lupton S, Schmierer A, Hjerrild KJ, Jerzy R, Clevenger W, et al. Человеческий интерлейкин 7: молекулярное клонирование и активность фактора роста в клетках B-линии человека и мыши. Proc Natl Acad Sci USA (1989) 86:302–6. doi: 10.1073/pnas.86.1.302

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

43. Nelissen I, Martens E, Van den Steen PE, Proost P, Ronsse I, Opdenakker G, et al. Желатиназа B/матриксная металлопротеиназа-9 расщепляет интерферон-бета и является мишенью для иммунотерапии. Мозг (2003) 126:1371–81. doi: 10.1093/brain/awg129

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

44. Эйнарсон Т.Р., Береза ​​Б.Г., Мачадо М.Сравнительная эффективность интерферонов при рецидивирующем-ремиттирующем рассеянном склерозе: метаанализ реальных исследований. Curr Med Res Opin (2017) 33:579–93. doi: 10.1080/03007995.2016.1276895

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

45. Международная генетика рассеянного склероза, C. Геномная карта рассеянного склероза указывает на восприимчивость периферических иммунных клеток и микроглии. Наука (2019) 365 (460): eaav7188. doi: 10. 1126/наука.aav7188

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

46. Лундмарк Ф., Дювефельт К., Якобеус Э., Кокум И., Вальстрём Э., Хадеми М. и др. Изменение альфа-цепи рецептора интерлейкина 7 (IL7R) влияет на риск рассеянного склероза. Нат Жене (2007) 39:1108–13. doi: 10.1038/ng2106

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

47. Грегори С.Г., Шмидт С., Сет П., Оксенберг Дж. Р., Харт Дж., Прокоп А. и др. Альфа-цепь рецептора интерлейкина 7 (IL7R) показывает аллельную и функциональную связь с рассеянным склерозом. Нат Жене (2007) 39:1083–91. doi: 10.1038/ng2103

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

48. Скарисбрик И.А. Деградация рассеянного склероза: ферментативные каскады в развитии и прогрессировании воспалительного заболевания центральной нервной системы. Curr Top Microbiol Immunol (2008) 318:133–75. doi: 10.1007/978-3-540-73677-6_6

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

49. Рич Б.Е., Кампос-Торрес Дж., Теппер Р.И., Мореадит Р.В., Ледер П.Кожная лимфопролиферация и лимфомы у трансгенных мышей с интерлейкином 7. J Exp Med (1993) 177:305–16. doi: 10.1084/jem.177.2.305

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

50. Kamiguti AS, Lee ES, Till KJ, Harris RJ, Glenn MA, Lin K, et al. Роль матриксной металлопротеиназы 9 в патогенезе хронического лимфоцитарного лейкоза. BrJ Haematol (2004) 125:128–40. doi: 10.1111/j.1365-2141.2004.04877.x

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

51.Хорев Л., Унгер С., Молхо-Пессах В., Меир Т., Малый А., Степенский П. и др. Генерализованный веррукоз и восприимчивость к ВПЧ-3, связанные с Т-клеточной лимфопенией CD4, вызванной наследственным дефицитом человеческого интерлейкина-7. J Am Acad Dermatol (2015) 72:1082–4. doi: 10.1016/j.jaad.2015.02.1118

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

53. De Smedt R, Morscio J, Reunes L, Roels J, Bardelli V, Lintermans B, et al. Ориентация на активацию PIM1, вызванную цитокинами и терапией, в доклинических моделях Т-клеточного острого лимфобластного лейкоза и лимфомы. Кровь (2020) 135:1685–95. doi: 10.1182/blood.201

80

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

54. Buffière A, Uzan B, Aucagne R, Hermetet F, Mas M, Nassurdine S, et al. Т-клеточный лимфобластный лейкоз демонстрирует аутокринную продукцию интерлейкина-7. Онкоген (2019) 38:7357–65. doi: 10.1038/s41388-019-0921-4

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

55. Hixon JA, Andrews C, Kashi L, Kohnhorst CL, Senkevitch E, Czarra K, et al.Новые моноклональные антитела против IL-7Rα демонстрируют эффективность против Т-клеточного острого лимфобластного лейкоза в доклинических моделях. Лейкемия (2020) 34:35–49. doi: 10.1038/s41375-019-0531-8

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

56. Опденаккер Г., Абу Эль-Асар А., Ван Дамм Дж. Остаточные эпитопы, вызывающие аутоиммунитет: от модели к полезной парадигме. Trends Immunol (2020) 41:367–78. doi: 10.1016/j.it.2020.03.004

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

57.Dai Z, Wang EHC, Petukhova L, Chang Y, Lee EY, Christiano AM, et al. Блокада передачи сигналов IL-7 подавляет воспалительные реакции и обращает очаговую алопецию у мышей C3H/HeJ. Sci Adv (2021) 7: eabd1866. doi: 10.1126/sciadv.abd1866

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Истории нашего сообщества — House of Vaz | by Tanzanite Торонто

Танзания, расположенная на восточном побережье Африки, является Меккой сафари для многих туристов и раем для многих гоанцев благодаря своей богатой культуре, пляжам, еде и множеству других прекрасных достопримечательностей благодаря теплому, благоухающему тропическому климату.Однако многим людям пришлось покинуть эту прекрасную землю ради улучшения своих семей. В частности, одна семья — это семья Ваз.

Виктор, Джоанна и Хилари Ваз Анджела, Мама-Джоанна, Лина, Ларри, Джонни и Лесли Ваз Дети, пропавшие без вести на фото : Хилари, Лили, Энтони, Регина и Алоизиус

Династия Ваз состоит из: Виктора Ваза и его детей Хилари Ваз, Лили Пезаманос (урожденная Ваз), Лесли Ваз, Ларри Ваз, Лина Пинто (урожденная Ваз), Анджела Перейра (урожденная Ваз), Энтони Ваз и Регина Диас (урожденная.Ваз). Они много лет жили в Танзании, прежде чем большинство из них приняли решение мигрировать в Канаду. Как правнучка клана Ваз, я хотела бы пролить свет на то, почему моя семья покинула Танзанию, что в то время было общей причиной, разделяемой большинством семей, эмигрировавших из Танзании в Канаду.

В 1967 году Алоизиус Ваз, его жена Зерина и их дети были первыми пионерами, прибывшими в Канаду.

Алоизиус (которого многие знают как одного из основателей «Гоанской зарубежной ассоциации» в Канаде) получил письмо из Канады, в котором техническим специалистам предлагалось работать на Канадской национальной железной дороге. Хотя у него была отличная должность в Восточноафриканских железных дорогах в качестве электрика, он решил искать лучшие возможности в Канаде, в том числе лучшее образование для своих детей, поэтому другие братья и сестры Ваз также решили переехать сюда. Благодаря техническим навыкам Алоизиуса его семья была легко принята в Канаду в 1969 году.

Затем Алоизиус спонсировал своего брата Ларри Ваза и его семью, которые приехали сюда в 1972 году.

Ларри, известный и уважаемый инженер в Восточной Африке. Железные дороги переехали в Канаду и были с энтузиазмом приняты Канадскими национальными железными дорогами.

В 1974 году Алоизиус спонсировал своего старшего брата Хилари Ваз, невестку Луизу и их сына.

Хилари Ваз, выросший со многими танзанийцами гоанского происхождения в школе Св. Станислава в Бомбее, Индия, был хорошо известен своими спортивными способностями, отличился в хоккее на траве и крикете. Хилари работала таможенником, а его жена Луиза была директором школы Святого Франциска Ксаверия в Дар-эс-Саламе.

Их сестра Анджела с мужем Огги Перейрой и детьми приехала в Канаду в 1976 году после того, как их спонсировал старший брат Анжелы Ларри.

Семья Анджелы и Огги принимала активное участие в деятельности Танзанитской ассоциации, в том числе участвовала в концертах по хоккею на траве и Гоа/Африке. Огги был вице-президентом, а затем в 1998 году стал президентом Танзанитского комитета.

В те дни новым иммигрантам было очень трудно найти работу, так как здесь не принимались документы и требовался опыт работы в Канаде, поэтому многие люди были вынуждены устраиваться на работу, которая не соответствовала их специальности. Решительность наших родителей и любовь к своим семьям — вот что поддерживало их каждый день.Хотя они покинули Танзанию, они продолжали прививать своим детям ценности и корни своей родины, будь то приготовление гоанских блюд, таких как пулао и сорпотель, поедание мандази с чаем, пение песен на суахили, игра в хоккей на траве или встречи со старыми друзьями. на пикники и танцы. Нам ни разу не дали забыть о нашем наследии, за что мы все им благодарны.

Хотя Хилари, Ларри и Анджела скончались; их наследие и учения живут во многих молодых поколениях Ваз, вдохновленных их родителями/бабушками и дедушками.Сами дети Ваз решили присоединиться к ассоциации Танзанитов, участвуя в комитетах или выступая на мероприятиях; Кэрол Перейра Д’Суза (дочь Анджелы) была президентом танзанитского комитета в 2001 году. Райан Де Соуза (внук Анджелы) входил в состав танзанитского комитета 2017–2018 годов, а я (внучка Хилари) выступала на мероприятиях и была на танзанитском комитете 2017 года. –2018 и в настоящее время нахожусь в комитете по этому году.

В заключение мы все гордимся нашим восточноафриканским наследием и, безусловно, ценим решение наших родителей и/или бабушек и дедушек переехать в Канаду примерно 40–50 лет назад; все в надежде на большее и светлое будущее для своих детей!

— Меган Ваз

Лечение диабета 2 типа: имеет ли значение ИМТ?

Ожирение и диабет 2 типа тесно связаны между собой. Наличие большего количества жира в организме увеличивает ваши шансы на развитие диабета. А если у вас диабет, лишний вес означает, что вы подвержены более высокому риску осложнений, таких как сердечный приступ или инсульт.

Когда вы говорите о диабете и весе, ваш врач, скорее всего, будет ссылаться на ваш индекс массы тела (ИМТ), который является мерой того, сколько жира у вас есть. По данным Американской диабетической ассоциации (ADA), это важный показатель для контроля диабета и веса, но у него есть свои ограничения.

Вот что вам нужно знать о своем ИМТ и о том, как он вписывается в вашу программу контроля веса при диабете.

Что такое ИМТ и диабет

Вы можете рассчитать свой собственный ИМТ, разделив свой вес в фунтах на свой рост в дюймах, возведенный в квадрат. Затем умножьте это число на 703.

Если вы не хотите заниматься математикой, вы можете ввести свою информацию в онлайн-калькулятор ИМТ, такой как тот, который доступен на веб-сайте Центров по контролю и профилактике заболеваний (CDC).

Обычно ИМТ от 18,5 до 24,9 считается нормальным или здоровым весом. ИМТ в диапазоне от 25 до 29,9 считается избыточным весом. По данным CDC, ИМТ 30 и выше относится к категории ожирения.

Если ваш ИМТ классифицирует вас как страдающего ожирением, ваш врач может использовать измерение для классификации вашего уровня ожирения и оценки риска связанных со здоровьем осложнений, говорит Чери Ваз, доктор медицинских наук, доцент медицины в Университете Темпл в Филадельфии. Ожирение 1 степени – это ИМТ от 30 до 34.9, класс 2 — от 35 до 39,9, а класс 3 — 40 и выше. В целом, чем выше класс ожирения, тем выше риск возникновения проблем со здоровьем.

Почему ИМТ важен

Эксперты говорят, что ИМТ — важная информация, которую необходимо знать, особенно если у вас диабет. И вот почему:

Это маркер, который ваш врач может использовать для определения риска осложнений диабета 2 типа , — говорит доктор Ваз. Более высокий ИМТ повышает риск неконтролируемого диабета и связанных с ним осложнений, таких как болезни сердца, инсульт, почечная недостаточность, проблемы с нервной системой и глазами.

Исследование более 14 000 человек, опубликованное в январе 2015 года в Southern Medical Journal , показало, что более высокий индекс массы тела, даже если он был умеренно высоким, увеличивает риск этих осложнений.

Недорого. Все, что вам нужно для расчета ИМТ, — это весы для определения вашего веса и измерительная лента для определения вашего роста.

Врачи также могут использовать двухэнергетическую рентгеновскую абсорбциометрию (DXA), магнитно-резонансную томографию (MRI) и компьютерную томографию (CT) для измерения жира в организме, говорит Ваз, но эти тесты дороги и часто не покрываются страхование.

Это может мотивировать вас на похудение. Выяснение того, где вы находитесь в таблице ИМТ, может быть тем, что подтолкнет вас к изменению образа жизни, чтобы похудеть, говорит Кевин Ферлонг, DO, доцент эндокринологии в Медицинском колледже Сидни Киммела в Университете Томаса Джефферсона в Филадельфии. По словам ADA, потеря всего лишь небольшого количества веса — от 10 до 15 фунтов — может помочь улучшить уровень сахара в крови, кровяное давление и уровень холестерина.

Кроме того, если вы похудеете, ваш врач может уменьшить количество принимаемых вами лекарств от диабета.

Ограничения ИМТ

Каким бы полезным ни был ИМТ, инструмент имеет некоторые недостатки.

Не измеряет мышцы. Ваз говорит, что ИМТ не различает лишний вес, связанный с жиром, и лишний вес, связанный с мышцами, поэтому мускулистый здоровый человек может попасть в категорию с избыточным весом. Если вы начнете тренироваться, особенно с тренировками с отягощениями, и будете терять жир, одновременно наращивая мышечную массу, вы совершите здоровое изменение, но оно не обязательно будет отражаться только на вашем ИМТ.

Этническая принадлежность не учитывается. «У представителей азиатской национальности могут развиться метаболические последствия при более низком ИМТ, чем у других пациентов», — говорит Ваз. «У некоторых людей может быть высокий уровень сахара в крови, высокий уровень триглицеридов и ожирение печени, если их ИМТ находится в диапазоне высокого нормального веса».

В этой группе точка отсечки ИМТ 23 или выше должна использоваться при скрининге избыточного жира, и будет рекомендовано изменение образа жизни, добавляет она.

Не измеряет жир на животе. Большое количество висцерального жира — жира, который накапливается вокруг органов в брюшной полости — представляет большую проблему, чем избыток подкожного жира, который находится под кожей в остальной части вашего тела, потому что он подвергает вас более высокому риску инсулинорезистентности и сердечных заболеваний. .

«Окружность талии — хороший прямой показатель висцерального жира», — говорит Ваз. Женщины с талией более 35 дюймов и мужчины с талией более 40 дюймов подвергаются более высокому риску осложнений со здоровьем.

С высоким ИМТ связано позорное клеймо. Общество может осуждать людей с избыточным весом или ожирением, что может помешать людям узнать свой ИМТ.

Общая картина

Ваш ИМТ нельзя игнорировать, но помните, что это всего лишь один из показателей вашего общего состояния здоровья.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

2019 © Все права защищены. Карта сайта